Determinación De Amino Ácidos Terminales Con Grupo Alfa Amino Libre. Método De Sanger
Páginas: 4 (970 palabras)
Publicado: 22 de agosto de 2011
INTRODUCCIÓN
| DNP- Val | DNP- Phe | DNP- Gly | DNP- Asp | DNP- Ala | DNFB | Problema |
Rf | 0.6808 | 0.5943 | 0.6721 | 0.7478 | 0.7419 | 0.4481 | 0.44060.53750.6876 |
La determinación de laestructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograr esto fue Frederik Sanger, quien diseño unmétodo capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del 1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuestoquímico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionara con los grupos imidazol, fenólicos y epsilonamino; por lo que se dará una dinitrofenilacion en la cadena lateral de la Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura total de losenlaces peptídicos, lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más difícil de romper.
Los DNP deaminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar.
Estos DNP de aminos terminales sonsometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por lo que se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al amino terminal de la proteína.
OBJETIVOS
*Determinar a través del método de Sanger el amino terminal de una proteína.
* Observar el comportamiento químico de los aminoácidos presentes en la proteína con el DNFB.
INTERPRETACIÓN DE CADA PASOEFECTUADO EN LA PREPARACIÓN DEL DERIVADO DINITROFENILADO.
A. Preparación del Derivado Dinitrofenilado de la Hemoglobina.
a) La reacción se debe de llevar en Medio Básico, como el amino terminal esta...
| DNP- Val | DNP- Phe | DNP- Gly | DNP- Asp | DNP- Ala | DNFB | Problema |
Rf | 0.6808 | 0.5943 | 0.6721 | 0.7478 | 0.7419 | 0.4481 | 0.44060.53750.6876 |
La determinación de laestructura primaria de una proteína suele denominarse secuenciación Existen varias maneras de determinar la secuencia de aminoácidos, el primero en lograr esto fue Frederik Sanger, quien diseño unmétodo capaz de determinar la secuencia de los aminoácidos en una proteína, el cual consiste en el marcaje del amino terminal a través del uso del 1-Fluoro-2,4-Dinitrobenceno (DNFB). Este compuestoquímico color amarillo reacciona con los grupos amino libres en condiciones ligeramente básicas, formando los dinitrofenil derivados (DNP-aa), también reaccionara con los grupos imidazol, fenólicos y epsilonamino; por lo que se dará una dinitrofenilacion en la cadena lateral de la Tirosina, Histidina y Lisina.
Al hidrolizar el péptido o la proteína ya dinitrofenilada, se da una ruptura total de losenlaces peptídicos, lo que nos da como resultado un hidrolizado que contendrá aminoácidos libres y DNP derivados que se conservan intactos, ya que su enlace es más difícil de romper.
Los DNP deaminoácidos terminales, a diferencia de los demás DNP y de los aminoácidos libres, son no polares por lo que se pueden extraer muy fácilmente con un disolvente no polar.
Estos DNP de aminos terminales sonsometidos a una cromatografía en capa fina o en papel Whatman; por lo que se determina por comparación con otros DNP derivados de aminoácidos, al amino terminal de la proteína.
OBJETIVOS
*Determinar a través del método de Sanger el amino terminal de una proteína.
* Observar el comportamiento químico de los aminoácidos presentes en la proteína con el DNFB.
INTERPRETACIÓN DE CADA PASOEFECTUADO EN LA PREPARACIÓN DEL DERIVADO DINITROFENILADO.
A. Preparación del Derivado Dinitrofenilado de la Hemoglobina.
a) La reacción se debe de llevar en Medio Básico, como el amino terminal esta...
Leer documento completo
Regístrate para leer el documento completo.