Determinación De Enzimas Con Actividad Proteolítica Por El Método De Kunitz

DETERMINACIÓN DE ENZIMAS CON ACTIVIDAD PROTEOLÍTICA POR EL MÉTODO DE KUNITZ

Práctica no. 6
Determinación de enzimas con actividad enzimática por el método de Kunitz.

OBJETIVOS

El alumno:* Elaborará una curva estándar de actividad enzimática.
* Determinará la actividad proteolítica de la bromelaína, papaína, y otras proteasas.

DIAGRAMA DE FLUJO

RESULTADOS

1. Curvade actividad enzimática

Tabla 1. Curva de actividad enzimática. Actividad enzimática de la Tripsina.

Tubo | Concentración de Tripsina(mg/mL) | A280 | A280 Corregida |
  | Problema | Testigo ||
T1 Y 1 | 0.04 | 0.254 | 0.089 | 0.165 |
T2 Y 2 | 0.08 | 0.346 | 0.082 | 0.264 |
T3 Y 3 | 0.12 | 0.458 | 0.088 | 0.37 |
T4 Y 4 | 0.16 | 0.56 | 0.095 | 0.465 |
T5 Y 5 | 0.2 | 0.601 | 0.089| 0.512 |
PROBLEMAS |
TI Y I | Bromelaina 1:10 | 1.113 | 0.228 | 0.888 |
TII Y II | Bromelaina 1:20 | 0.717 | 0.198 | 0.519 |
TIII Y III | Papaína | 0.164 | 0.112 | 0.054 |

Gráfica 1. Curvade actividad enzimática de Tripsina

A) Cuántas unidades trípticas hay por miligramo de tripsina?

UT= 2.2375/20= 0.11
Es decir, hay 0.11 UT por cada mg de tripsina
1mg de tripsina = 0.1 UT0.04---------------- x
x= 0.004 UT
2. Curva de actividad enzimática específica.

Tabla 2. Curva de actividad enzimática específica para la digestión de caseína por tripsina.

Tubo |Unidades tripticas | A280 corregida |
1 | 0.004 | 0.165 |
2 | 0.008 | 0.264 |
3 | 0.012 | 0.37 |
4 | 0.016 | 0.465 |
5 | 0.020 | 0.512 |

Gráfica 2. Actividad enzimática especifica.a) Indique la actividad enzimática especifica por gramo de muestra, de la piña ( papaína) y el ablandador (bromelaína):

Para obtener los valores de la actividad enzimática específica de la papaínay la bromelaína es necesario interpolar los valores de A280 corregida que aparecen en la Tabla 1 sobre la línea de tendencia de la Gráfica 2, sin embargo, las cantidades quedan fuera del rango de la...