Determinación de parámetros fisiológicos de guisantes (pisum sativum l.) bajo estrés por metales pesados.

MATERIALES Y MÉTODOS:

1.- CONDICIONES DE CULTIVO

Sembraremos las semillas de guisante (var. Lincoln) en recipientes (220 ml) que contengan (aprox. 2/3 del volumen total del recipiente) un sustrato preparado a base de turba y vermiculita/perlita mezclados a partes iguales.

Con el fin de inducir estrés por metales pesados se establecerán dos tratamientos de riego a lo largodel experimento:

1. • Solución Hoagland + 0 μM CdCl2 ( En adelante “control”

2. • Solución Hoagland + 30 μM CdCl2 ( En adelante “Cd”

Nota: Un litro de solución Hoagland completa contiene las siguientes cantidades de las sales A-E: 2.30 ml de A; 4.5 ml de B; 2.30 ml de C, 1 ml de D y 1 ml de E,
Donde:
1. • A.- MgSO4 7H2O; 1M
2. • B.-Ca(NO3)2; 1M
3. • C.- H2KPO4; 1M
4. • D.- Solución de hierro: 5 g FeCl3 + 5 g ácido tartárico por litro.
5. • E.- Solución de micronutrientes: 2,9 g H3BO3 + 1,2 g MnCl2 + 1,4 g ZnCl2 por litro.

2.- CÁLCULO DE RIEGO.

Durante el experimento, estableceremos unas condiciones de riego del 65% de la capacidad de campo (CC). Para tal fin necesitamos conocerla CC del sustrato que hemos preparado (máximo volumen de agua disponible para las plantas). Colocamos un vaso de plástico perforado en la balanza y lo taramos. Llenamos el vaso del sustrato elegido y anotamos su peso (Pi). A continuación regamos a saturación y dejamos que el agua sobrante drene totalmente. Anotaremos el peso resultante en estas condiciones (Pf). La diferencia entre el Pf y elPi representa el volumen de agua necesario para alcanzar CC.

Calculo de la capacidad de campo: (Anexo 1)

100% (CC) > 93,8975

65% > X X = 61ml por cada 100 g.

Nuestras muestras tienen un peso seco de 60 g debemos añadir 36 ml de Hoagland a cada uno de los botes.

3. – TRATAMIENTO.

Cada grupo de alumnos establecerá doslotes (control y Cd), formado por 5 recipientes cada uno en los que se sembrarán 5-6 semillas de guisantes por recipiente. Tras la siembra, las semillas se regarán en las condiciones descritas en 2 con solución Hoagland control durante 14 días. A partir de ese momento las plantas bajo tratamiento Cd serán regadas con solución Hoagland + 30 μM CdCl2 durante 35 días más hasta completar elexperimento.

1. 4.- PARÁMETROS DE CRECIMIENTO. (Anexo 2)

Durante un periodo de uno a dos meses (en las sesiones prácticas que se indiquen) se realizarán las siguientes medidas (n= 3-5):

2. • Longitud del tallo y raíz. Se medirán las plantas desde la superficie del sustrato hasta la yema apical o extremo de la raíz para calcular, respectivamente, la longitud del talloy raíz.

3. • Peso fresco (Pf) y seco (Ps). Se pesan las plantas en fresco (Pf), se secan durante 48 horas a 60ºC y se vuelven a pesar (Ps). Para el cálculo de los Pf y Ps totales se tendrá en cuenta el número total de plantas.

4. • Área foliar media (LA). Se dibuja la superficie de las hojas sobre un folio en blanco. La superficie se calcula recortando el folio ycomparando el peso de las figuras resultantes con un patrón de superficie conocida.

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Gráfica 1: Representación de la longitud del tallo de plantas control y plantas con Cd a tiempos de 28 y 35 días de tratamiento. Podemos observar que al aumentar el tiempo las plantas control y las plantas sometidas a estrés por Cd tienen prácticamente el mismo crecimiento en la longitud del tallo (cm).[pic]

Gráfica 2: Representación de la longitud de la raíz de plantas control y plantas sometidas a estrés por Cd a tiempos de 28 y 35 días de tratamiento. Podemos observar que en las plantas sometidas a estrés por Cd aparece un crecimiento positivo y superior a las plantas control. Las plantas control tienen un crecimiento negativo debido a que existía una planta con una longitud de la raíz...