Diagnóstico del Dengue

INTERÉS CLÍNICO
El dengue es una enfermedad viral aguda transmitida por mosquitos del género Aedes (fundamentalmente el Aedes aegypti y el Aedes albopictus). La misma se caracteriza por fiebre, dolor de cabeza, dolor detrás del globo ocular, artralgia, rash, náuseas y vómitos. Algunas de estas infecciones derivan en la fiebre hemorrágica del dengue (FHD), una de las formas graves de laenfermedad, la cual se asocia a alteraciones de la permeabilidad vascular y en algunos casos de FHD se producen complicaciones severas que conducen al llamado síndrome de choque por dengue (SCD).
En los últimos años, la fiebre del dengue, ha re-emergido acompañada de una amplia distribución geográfica tanto del virus como del mosquito, una incrementada actividad epidémica, el desarrollo dehiper-endemicidad o lo que es lo mismo la co-circulación de los diferentes serotipos y la aparición de la enfermedad en nuevas zonas geográficas. En 1998 fue la enfermedad infecciosa tropical más importante, seguida de la malaria, con un estimado de 100 millones de casos, 500 000 de fiebre hemorrágica de dengue y 25 000 muertes.
En la actualidad se conoce que la detección de anticuerpos IgM específicoscontra el virus dengue indica infección activa o reciente. Esta clase de anticuerpos se desarrolla tempranamente y de forma general se pueden detectar a partir del quinto día de comienzo de los síntomas y como promedio disminuyen a partir de los 30 días, aunque pueden detectarse hasta los 60 días o más, es por ello que la fiebre de dengue es usualmente diagnosticada con el empleo de ELISA tipocaptura para la detección de anticuerpos IgM anti dengue.
El UMELISA DENGUE IgM PLUS, concebido para la detección de anticuerpos IgM dirigidos contra los cuatro serotipos del virus dengue en muestras de suero humano y sangre seca sobre papel de filtro, es un ensayo inmunoenzimático de gran utilidad, tanto en el diagnóstico de casos clínicamente sospechosos, como en los sistemas de vigilanciaepidemiológica de esta enfermedad.
FUNDAMENTO DEL ENSAYO
El UMELISA DENGUE IgM PLUS es un ensayo inmunoenzimático heterogéneo en su variante captura que emplea las ventajas de la reacción de alta afinidad entre la Estreptavidina y la Biotina y donde se utilizan como fase sólida tiras de ultramicro ELISA (10 microlitros por pocillo) revestidas con anti IgM humana.
Las muestras se incuban en los pocillosde las tiras y los anticuerpos en su superficie capturan la IgM presente en el suero. A continuación, previo lavado que elimina los componentes de la muestra no fijados, se añade el antígeno de dengue (mezcla de los 4 serotipos del virus) que se unirá a la IgM específica capturada en el paso anterior.
Una vez eliminado el antígeno en exceso, se añaden anticuerpos monoclonales biotiniladosespecíficos al virus dengue (Anticuerpos Biotinilados), que se unirán al complejo formado sobre la fase sólida.
Luego de otro paso de incubación y lavado se aplica el conjugado Estreptavidina / Fosfatasa Alcalina (F.A.), que se unirá al complejo formado anteriormente en caso de reacción positiva. Un nuevo lavado de las tiras eliminará el conjugado en exceso. Por último, se adiciona el sustratofluorigénico (4-Metilumbeliferil fosfato), que será hidrolizado y la intensidad de la fluorescencia emitida permitirá detectar en la muestra la presencia de anticuerpos IgM específicos al virus del dengue.

ANTICUERPOS ANTIDENGUE
Los exámenes de laboratorio para confirmar la infección por el virus del dengue pueden abarcar la detección del virus, el ácido nucleico viral, antígenos o anticuerpos o unacombinación de estas técnicas. Después de la aparición de la enfermedad, el virus se puede detectar durante cuatro a cinco días en el suero, el plasma, las células sanguíneas circulantes y otros tejidos. Durante las primeras etapas de la enfermedad, se puede usar el aislamiento del virus, la detección del ácido nucleico o el antígeno para diagnosticar la infección. Al final de la fase aguda de...