Diagnóstico molecular enf. infecciosas

Diagnóstico molecular de enfermedades infecciosas

INTRODUCCION
Los métodos tradicionales de identificación microbiana se basan en las características fenotípicas del microorganismo. Sin embargo, la mayoría de éstas características no son lo suficientemente sensibles para permitir la diferenciación inequívoca de una cepa.
El análisis del genoma microbiano abrió una nueva frontera para laidentificación y caracterización de los microorganismos. Los primeros estudios de hibridación del ADN se utilizaron para demostrar relaciones filogenéticas entre bacterias. La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y otras técnicas moleculares han simplificado y acelerado el proceso de amplificación y análisis de los ácidos nucleicos in vivo y, por consiguiente, el diagnóstico preciso de losmicroorganismos es ya una realidad.

TIPIFICACIÓN MICROBIANA TRADICIONAL
Biotipificación: Es la determinación de la relación de diferentes organismos con base en sus biogramas.
Antibiograma: perfil de susceptibilidad de un organismo a una variedad de agentes antimicrobianos.
Resistograma: Perfil de susceptibilidad a determinados colorantes y metales pesados.
Tipificación con bacteriocinas:susceptibilidad de la cepa a varias bacteriocinas, toxinas que son producidas por un grupo de cepas.
Análisis de proteínas. Las proteínas antigénicas de una gran variedad de organismos se detectan por anticuerpos específicos dirigidos contra ellas.
Análisis de fagos. Cuando una bacteria aislada se expone a un panel de fagos, se genera un perfil, lista de los bacteriófagos que tienen la capacidad deinfectar y destruir una bacteria.
Análisis cromatográfico. Emplea el tipo y la cantidad de ácidos grasos celulares presentes en el lisado de un organismo.

Tipificación con ácidos nucleícos
Análisis de plásmidos: Una de las primeras técnicas basadas en los ácidos nucleícos que se aplicó al diagnostico de las enfermedades infecciosas y a la caracterización de patógenos.
Plásmidos: fragmentos deADN auto replicativo que se encuentran en muchas bacterias, no pertenecen al genoma bacteriano y se puede perder o ganar. Pueden codificar genes de resistencia a antibióticos y ciertos factores de virulencia. A partir del número y tamaño de los plásmidos que tenga una bacteria, se pueden realizar estudios epidemiológicos y es posible establecer relaciones filogenéticos entre diversos aislamientosprovenientes del mismo individuo.

El análisis de plásmidos se ha empleado para la búsqueda de resistencia a antibacterianos en brotes nosocomiales. Los estudios de epidemiología molecular has avanzado en gran parte por el análisis de fragmentos de restricción, que permite monitorear la diseminación de los plásmidos codificantes de resistencia entre organismos y entre hospitales, comunidades eincluso países.

Patrón de enzimas de restricción.
Las endonucleasas son enzimas de restricción que reconocen secuencias de ADN específicas y producen cortes en la doble cadena de ADN. El número y el tamaño de los fragmentos de restricción está dado por la secuencia del ADN. Se extrae el ADN a partir de muestras microbianas y se digiere con las endonucleasas. Los fragmentos obtenidos se separanpor tamaño mediante electroforesis en gel de agarosa. El patrón se visualiza con la tinción de bromuro de etidio bajo luz ultravioleta. Este análisis es altamente reproducible y muy exacto para determinar la relación filogenético entre cepas microbianas, la limitación es la dificultad para realizar la comparación entre perfiles constituidos por cientos de fragmentos.

Ribotipificacion.
Lospatrones de restricción pueden observarse por hibridación de fragmentos de ADN con operones ribosomales bacterianos marcados, los cuales codifican para rADN (acido ribonucleico ribosomal) de 16S y/o 23S. Las secuencias de rRNA que son específicas de especies o grupos también han sido empleados para realizar la construcción de oligonucleótidos empleados como sonda para la detección in situ de...