Diagnostico clínico de EGB mediante PCR


LICENCIATURA EN BIOLOGÍA MOLECULAR




Temas selectos de biología molecular: Microbiología Clínica
TÍTULO: “Diagnóstico Clínico de Estreptococcus Beta Hemolítico mediante PCR”

FECHA DE ENTREGA:
30 DE OCTUBRE DE 2014






INTRODUCIÓN
El Estreptococo β hemolíticodel Grupo B (EGB), también llamado Streptococcus agalactiae, puede encontrarse como colonizante en el aparato digestivo del ser humano y en aparato genital de las mujeres, sin causar síntomas o provocar daños.
Pero también es uno de los gérmenes que producen con mayor frecuencia infección bacteriana perinatal. En la embarazada puede ser causa de infección urinaria, que se relaciona con un nivelalto de colonización genital, y de corioamnionitis y endometritis. En el niño puede manifestarse como infección localizada o sistémica desde el nacimiento hasta los 3 meses, raramente después. La mayoría de los casos son de inicio precoz y casi todas las infecciones mortales suceden en el primer día de vida.
La enfermedad invasiva en los neonatos se clasifica basándose en el momento de comienzo.En la sepsis temprana, los síntomas aparecen dentro de la primera semana de vida (dificultad respiratoria, apnea, shock, neumonía y, menos frecuente, meningitis), aunque el 90% estará sintomático en la primeras 48 hs. En la sepsis tardía, los síntomas se presentan generalmente en la 3ª o 4ª semana de vida.
El factor más importante es la exposición del recién nacido al microorganismo con elaparato genital materno, pero otros factores como el parto pretérmino, corioamnionitis materna, rotura de membranas más de 18 horas antes del nacimiento y la exposición a un alto inóculo por una cepa virulenta de EGB, pueden modificar en forma adversa la evolución del lactante.
En la actualidad, existen controversias importantes en el mundo acerca de cuál es la mejor forma de prevenir los casos deinfección neonatal. Se ha demostrado que el diagnostico bacteriológico de EGB utilizando medios de cultivo suele ser engañoso ya que los resultados falsos negativo son muy elevados. Es por ello que las técnicas moleculares que han sido ampliamente publicitadas en los últimos 7 años en los laboratorios clínicos han comenzado a usarse en una amplia variedad de enfermedades infecciosas y diagnósticoclínico. Actualmente existe una variedad de paquetes comerciales, especialmente en el área de las enfermedades infecciosas, que contienen todo lo necesario para realizar un examen, como es el caso de la hibridación. Sin embargo, esta técnica puede tener una baja sensibilidad debido a que en algunos casos existe una sola copia de la secuencia en blanco. Por esta razón las técnicas de amplificación, quepueden producir millones de copias de un determinado segmento de ADN o ARN, han tenido un impacto extraordinario en muchas áreas del diagnóstico clínico. Así pues, existen varias técnicas de amplificación las cuales varían ligeramente en su método de amplificación.
Una de las técnicas de amplificación más usadas en la actualidad, tanto elaboradas en el propio laboratorio como comercialmente, esla reacción en cadena de la polimerasa o PCR, la cual afortunadamente permite trabajar con EGB y para ello que existen numerosas técnicas de amplificación disponibles comercialmente que detectan al gen hylB, el cual codifica a la hialurato liasa que se encuentra presente en cepas de EGB. Es por ello que si se conoce la secuencia del Estreptococo β-hemolítico del grupo B, entonces se podríaidentificar esta especie mediante PCR con los oligonucleótidos específicos.

En este trabajo tenemos como objetivos el estudio del Estreptococo β hemolítico del grupo B; realizar los procedimientos necesarios para su aislamiento, observar el crecimiento de la bacteria desde dos medios de cultivo diferentes e identificar mediante PCR la presencia de EGB en un caso clínico.
METODOLOGÍA
Caso...