DIAGNOSTICO MOLECULAR PARASITOLOGIA

Diagnóstico molecular de Tripanosomiasis – Trypanosomacruzi

Cuando la tripanosomiasis entra en fase latente o crónica la causa no puede ser detectada por métodos convencionales debido la baja parasitemia sin embargo el paciente acudirá al centro de salud por algún problema como insuficiencia cardiaca específicamente la mayoría de veces es por un bloqueo del ramo derecho en el 95% de los casosreportados, arritmias, estenosis del esófago, megaesófago en el 90% de casos por causa de este parásito y megacolon en un 98% de los casos, es por ello que se utilizan métodos de diagnóstico molecular o serológico que permiten hallar el anticuerpo IgG por ELISA o el antígeno, la secuencia de ADN del cinetoplasto de este parásito, xenodiagnóstico, inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinaciónindirecta/directa y fijación del complemento.
Entre los métodos de diagnóstico molecular se tiene que mayormente se utiliza la reacción de cadena polimerasa basada en los iniciadores S35/S36 que se encargan de amplificar el fragmento de 330 pares de bases de una región variable del mini círculo, esta prueba consiste en que este iniciador amplifica los mini círculos de ADN del cinetoplasto deTrypanosomacruzi para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. Esta prueba se utiliza para confirmar la existencia de alguna especie de Trypanosoma sin embargo no es específica para la Trypanosomacruzi debido a que el iniciador tiene afinidad por el cinetoplasto de Trypanosomarangeli. Ambas especies comparten zonas endémicas sin embargo la diferencias es que Trypanosomarangeli afecta a animales porsaliva no por heces y además que este la mayoría de veces no produce enfermedad en los humanos. Debido a esta poca especificidad se utiliza adicionalmente el iniciador TcH2AF-R con la siguiente secuencia genética que permitirá la unión con el iniciador: 5´- AGT GGC AGA CTT TGG GGT C -3´ junto con el iniciador TcH2AR 5´- GAG AGT GAT GGG AGA GC -3´ estos amplificarán una banda de 234pares de bases deun elemento llamado SIRE que se encuentra a pocos pares de bases cerca del gen que codifica a la histona H2A. Para realizar este método por PCR es necesario tener una muestra de control negativo (sin ADN) y un positivo de una persona sana y la muestra problema. Estas pruebas se analizarán mediante la corrida electroforética en gel de agarosa. Este método de diagnóstico se utiliza para elseguimiento de tripanosomiasis en personas con enfermedades causadas por Trypanosomacruzi crónicas como el caso de una paciente con cardiomiopatía chagástica crónica en la que el tratamiento más indicado es un trasplante del órgano, a esta paciente se le hizo un seguimiento de la evolución pre y post quirúrgica en la que se tomó muestras de sangre y biopsia y utilizando los iniciadores anteriormentemencionados ( S335-S36 y TcH2AF-R) se realizó la corrida electroforética en gel de agarosa utilizando bromuro de etidio y las muestras controles. Se vio en los resultados que la muestra antes del procedimiento quirúrgico con la prueba general para Trypanosoma es decir con el iniciador S35-S36 fue positivo, luego de dos meses del trasplante la prueba fue negativa sin embargo luego de tres meses diopositivo para Trypanosomacruzi para ambos iniciadores esto muestra la reactivación que puede existir en el trasplante sin embargo debido a este diagnóstico permite que de alguna manera más precisa pueda administrarse el medicamento correcto y aumenta las probabilidades de supervivencia debido a que esta prueba permite la detección del parásito mucho antes que se presenten los síntomas en el paciente.De acuerdo con la organización panamericana de la salud además de la prueba de PCR debe realizarse una prueba confirmatoria de inmunofluorescencia indirecta como por ejemplo el que se realizó en una comunidad en Colombia en niños que presentaban enfermedades crónicas por Trypanosomacruzise le administró para el tratamiento benzonidazol para comprobar la eficacia del fármaco se realizó un...