DIAGNOSTICO MOLECULAR

DIAGNÓSTICO MOLECULAR
El análisis molecular tiene como objetivo la caracterización de las dos mutaciones responsables de la enfermedad. La mutación de origen paterno y materno puede ser la misma cuando se trata de una mutación prevalente en la población. Por ejemplo, la mutación F508del representa un 50% de los alelos en la población FQ española y se encuentra en homocigosis en un 27% de lospacientes. Por el contrario, un paciente homocigoto para una mutación poco frecuente sólo sería esperable en casos de endogamia o consanguinidad. Puesto que se ha descrito una alta especificidad molecular respecto al país y/o etnia de origen, es importante identificar las mutaciones presentes y su frecuencia y evaluar cuál es la estrategia más idónea en cada caso. Las diferencias entre áreasgeográficas son evidentes y la población española no es una excepción como ya se ha mencionado previamente.
Técnicas y nivel de detección
El análisis molecular se ha simplificado con la llegada de equipos comerciales que permiten analizar de forma simultánea y rápida las mutaciones de mayor prevalencia en la población mundial. El nivel de detección que ofrecen depende de la frecuencia de las mutacionesanalizadas y debe ser estimado en cada región. Por término medio varía entre el 70% y el 90%. En nuestro país, su sensibilidad oscila alrededor del 76%, lo que significa que un 60% de los pacientes pueden ser totalmente caracterizados, otro 35% lo son parcialmente y en un 5% no se detecta ninguna mutación.
Alternativamente, frente a un diagnóstico clínico inequívoco, el estudio familiar yprenatal se puede llevar a cabo combinando el análisis directo (mutación conocida) con la información obtenida del análisis de marcadores intragénicos (SNP’s, microsatélites).
La búsqueda de mutaciones raras viene condicionada por el tamaño del gen CFTR. En los últimos años, su abordaje se ha realizado mediante técnicas de cribaje que requieren mayor formación e infraestructura, por lo que se handesarrollado en laboratorios de referencia. Estas técnicas incluyen, fundamentalmente, el análisis de la conformación polimórfica de la cadena sencilla (SSCP)(Genephor Amersham Pharmacia Biotech, UK) y la electroforesis en gel de gradiente desnaturalizante (DGGE). Ambas técnicas de cribaje tienen una alta sensibilidad para la detección de cambios puntuales en la secuencia de DNA lo que permiteseleccionar las regiones candidatas. Finalmente, el análisis de la secuencia permitirá identificar la mutación o polimorfismo responsable del patrón anómalo. Esta estrategia permite aumentar el nivel de detección hasta un 95-98%. Un porcentaje de mutaciones CFTR son deleciones / inserciones de gran tamaño que no pueden ser detectadas mediante las técnicas de cribaje. Para su caracterización se necesitantécnicas más complejas como el Southern blot, la electroforesis en campos pulsantes (PFGE) o la más reciente, PCR múltiplex cuantitativa de pequeños fragmentos fluorescentes (QMPSF).
Probablemente, el continuo avance de la tecnología será un factor decisivo en la implantación de nuevos métodos de análisis más eficaces, algunos ya disponibles, como los secuenciadores multicanal y el análisis encromatografía líquida de alto rendimiento desnaturalizante (DHPLC) y otros, todavía en fase experimental (microchips).
Indicaciones del estudio molecular
El estudio genético está totalmente indicado en pacientes que refieren antecedentes familiares y ante una sospecha clínica, considerando la gran variabilidad fenotípica que tiene la enfermedad y que, excepcionalmente, puede ir acompañada de un testde sudor normal o en el límite. En pacientes con clínica dudosa, la identificación de las mutaciones confirma el diagnóstico y permite el control y tratamiento del paciente en una unidad especializada. En el periodo perinatal, se debe realizar el estudio molecular ante la presencia de íleo meconial y/o cribaje neonatal positivo. También es preceptivo el análisis a los padres, cuando la...