DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA INFECCION POR HCV

DIAGNOSTICO SEROLOGICO DE LA INFECCION POR HCV

INTRODUCCIÓN

Recién en 1975 luego de que estuvieran disponibles los reactivos para la detección de anticuerpos contra el HVA y el HbsAg, se reconoció por primera vez la existencia de un virus causante de hepatitis no A no B transmitido a través de la sangre.
En 1988 se logró infectar chimpancés con plasma contaminado y luego clonar el RNAviral presente en el suero de este primate, una vez obtenido el cDNA (Fig. 1).

Estrategia de detección y caracterización del HCV

Plasma de chimpancé infectado con material contaminado que había sido causa de hepatitis no A no B


Ultracentrifugación y extracción del DNA y el RNA del sedimento


Transcripción reversa del RNA mediante cebado al azar (random priming)


Clonado del cDNAen el bacteriófago lambda gt 11


Sembrado de aproximadamente 1000000 unidades formadoras de placas


Transferencia de las proteínas a filtros de nitrocelulosa e incubación de los filtros con suero de pacientes que habían padecido hepatitis no A no B


Detección de anticuerpos unidos mediante incubación con anticuerpos anti-Ig G humanos marcados


Realización de autorradiografía paradetectar los clones que expresaban proteínas específicas

(fig. 1)



Utilizando el fago lambda como vector se logro la síntesis de proteínas recombinantes en E. coli.
Con estas proteínas se fabricaron los primeros tests de ELISA y RIE posibilitándose la detección de anticuerpos en sangre dehemodonantes.


UBICACIÓN TAXONOMICA

Por la secuencia geonómica se lo ubica en la familia Flaviviridae como prototipo de un nuevo genero. Esta constituido por un grupo de genotipos heterogéneo, 6 tipos y 11 subtipos.


ULTRAESTRUCTURA

El HCV es un virus a RNA de simple cadena con polaridad positiva que consta aproximadamente de 9400 bases. Exhibe una región central de aproximadamente 9030nucleótidos que codifica una poli proteína precursora flanqueada por dos regiones no codificantes en los extremos 5’ (5’UTR de al menos 332 bases) y 3’ (3’UTR rica en extensiones de poli U o poli A de 20 a 100 bases). La región 5’ UTR es la mas conservada.
El HCV es un virus envuelto y la partícula mide 55 a 65 nm con un core interno de 30 a 35 nm. Alrededor de la envoltura viral se observanespículas.


GENOMA Y PROTEINAS

En el sentido 5’ al 3’ del RNA se ubican los genes del core, envoltura (E1/NS1), p7, NS2, NS3, NS4 a y b y NS5 a y b, que se corresponden a los pépticos homónimos.
La proteína de la capside o core (C22) se asocia al RNA conformando la nucleocapside.
E1 y E2 son glicoproteínas presumiblemente de membrana.
NS2 y NS4 son proteínas muy hidrofobicas yprobablemente se encuentran asociadas a membranas celulares.
NS3 posee varios dominios funcionales, uno serin-proteasa responsable del clivaje de la poli proteína entre NS3 y NS5, y otro con capacidad de unión a nucleosidos trifosfato vinculada a la actividad de helicasa.
NS5 contiene un dominio característico de las RNA polimerasas RNA dependientes lo que sugiere su rol.(Fig. 2)


C E1 E2/NS1 NS2NS3 NS4 NS5
5’ UTR 3’ UTR


(Fig. 2)

CICLO REPLICATIVO

El virus infecta hepatocitos, monocitos, linfocitos T CD4+, CD8+ y linfocitos B CD20+.
La localización subcelular de la replicación pareciera sercitoplasmática ya que se han encontrado epitopes de NS5 y C22 en el citoplasma de hepatocitos.


PATOGENIA DE LA ENFERMEDAD

No esta bien definida. Existen evidencias que sugieren la participación de mecanismos directos (virales) como indirectos ( mediados por el sistema inmune) en el daño hepático crónico.
La diversidad de cuasi especies del HCV en un mismo paciente le permite al virus...