Diluciones Seriadas

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE COAHUILA
Facultad de Ciencias Químicas

Práctica 1
“Diluciones”

Inmunología General

Saltillo, Coahuila 21 de Enero del 2013
OBJETIVO
Que el alumno aprenda la técnica de diluciones seriadas y doblemente seriadas para su uso posterior en técnicas inmunológicas y serológicas donde sea necesariodeterminar la actividad o el contenido de un reactivo o suero.
INTRODUCCIÓN
Los términos de dilución y titulación han sido ampliamente utilizados en el laboratorio en procedimientos inmunológicos y serológicos donde es necesario determinar la actividad o el contenido de un reactivo o suero. Un ejemplo es la dilución del suero para determinar el contenido de anticuerpos para propósitos de diagnóstico.Sin embargo debe quedar claro que estas técnicas proveen solamente un estimado de contenido actual.
En química una dilución es un proceso que reduce la concentración de una sustancia en una solución. Una solución seriada es la dilución repetida de una solución para conseguir una dilución geométrica de la solución original. Frecuentemente se realiza en experimentos que requieran soluciones altamentediluidas con gran exactitud, tales como aquellas que impliquen curvas de concentración en una escala logarítmica. Las diluciones seriadas son altamente usadas en las ciencias experimentales como la bioquímica, microbiología, farmacología e inmunología.
En inmunología se aplican las técnicas de dilución, entre otros casos, en la titulación de anticuerpos.
Es un examen de laboratorio que mide elnivel de anticuerpos en una muestra de sangre. El nivel de anticuerpos en la sangre le indica al médico si usted ha estado expuesto o no a un antígeno o a algo que el cuerpo reconoce como extraño.

MATERIAL
MATERIAL DE VIDRIO | REACTIVOS | EQUIPOS | MATERIAL BIOLÓGICO |
5 Tubos de ensayo (13x100mm) | Azul de metileno | Centrífuga | Suspensión de eritrocitos al 2% |
1 pipeta de 10ml |Solución salina | Vortex | |
1 pipeta de 1ml | Dodecil sulfato de sodio | | |
10 tubos serológicos (10x75mm) | Agua destilada | | |

PREPARACION DE ERITROCITOS AL 2% (LAVADO DE ERITROCITOS)
 Los eritrocitos pueden obtenerse de:
1.Una muestra de sangre con EDTA recolectada del donador de sangre.
2.Centrifugar durante 15 minutos y eliminar el suero.
3.Llenar el tubo conaproximadamente 4 ml de solución salina normal y mezclar bien, para preparar una suspensión homogénea de las células en la solución salina.
4. Centrifugar a revoluciones para lavado.
5. Decantar o aspirar el sobrenadante de solución salina.
6. Repetir pasos 3 - 5 de una a tres veces. La meta es lograr un sobrenadante claro e incoloro.
7.-Preparar la solución al 2% de eritrocitos en solución salina.Ejemplo: 0.2 ml de eritrocitos en 10ml de solución salina.

PREPARACION DE AZUL DE METILENO
* Azul de metileno................................................................................1 g
* Agua destilada...............................................................................100 ml

PROCEDIMIENTO
DILUCIONES SERIADAS
1.Prepare una serie de 5 tubos de 13x100mm y marque cada unode ellos de la siguiente manera: 1)1:10 2)1:100 3)1:1000 4)1:10000 5)1:100000
2.Adicione 9ml de agua a cada uno de los 5 tubos.
3.Transfiera 1ml del colorante azul de metileno en el primer tubo, agitar cuidadosamente en el vortex.
4.Transfiera 1ml de contenido del primer tubo al segundo y agite nuevamente en vortex.
5.Continúe este procedimiento hasta el ultimo tubo. Un mililitro seráeliminado del ultimo tubo para mantener el volumen constante en todos los tubos.
6.compare visualmente y registre los resultados.

DILUCIONES DOBLEMENTE SERIADAS
1.Prepare una serie de 10 tubos serológicos.
2.Adicione 1ml de solución salina estéril en los tubos 2→10
3.Posteriormente adicione 1ml de dodecil sulfato de sodio en los tubos 1 y 2.El tubo 1 representa el control sin diluir.
4.Mezcle...