Diluciones

Informe de laboratorio

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Trabajo Práctico N° 1: Diluciones

Materia: Introducción a la Biología Celular y Molecular

Resumen
El presente trabajo experimental de diluciones consistió en calcular una concentración desconocida por extrapolación, en donde:
* Se realizaron por duplicado diluciones seriadas al medio del colorante Azul deToluidina 0,16%p/v hasta desaparición completa del color.
* Se colocó luego una alícuota de cada dilución sobre una placa multiwells, agregando también una alicuota del blanco y de la muestra incógnita.
* La placa multiwells se llevó a un espectrofotómetro para averiguar las respectivas absorbancias de las duluciones. La absorbancia se registró en un lector de microplaca a 595 nm.
*Finalmente, con la ayuda de los promedios de las absorbancias se realizo un grafico de Absorbancia vs Concentración y se colocó una recta de regresión lineal para asi calcular la concentración de la muestra.

Introducción
Cuando se quiere realizar una dilución en la cual es necesario diluir mucho una solución concentrada (1/1000, 1/1000000), se suelen hacer diluciones sucesivas las cuales sedenominan: Diluciones Seriadas. Este método, ampliamente efectivo, se utiliza para disminuir los errores de medición que usualmente ocurren al pipetear volúmenes muy pequeños. Es decir, que se realizan en partes para alcanzar la concentración buscada.
Las unidades usualmente utilizadas para este tipo de trabajo se expresan en “mili…” y “micro…”,
1 mmol = 10-3 moles
1µmol= 10-6 moles
Lasunidades de concentración que se utilizan también en este tipo de prácticas son las siguientes:
%p/p= porcentaje masa en masa (gramos de soluto por cada 100 gramos de solución)
%p/v= porcentaje masa en volumen (gramos de soluto por cada 100ml de solución)
%v/v= porcentaje volumen en volumen (ml de soluto por cada 100ml de solución)
M= molaridad (numero de moles de soluto por cada 1000ml desolución)
Con respecto al material utilizado, se emplean las micropipetas, las cuales son capaces de absorber y transferir pequeños volúmenes de líquidos sin tener que lavar el aparato, ya que utiliza puntas desechables (tip) de plástico. Los volúmenes captables por estos instrumentos varían según el modelo, pero todos son iguales de precisos.
Para averiguar la concentración de una muestraincógnita, se suele realizar un gráfico que muestra concentración vs absorbancia, para así luego, al realizar una recta de regresión lineal, junto con la ecuación de recta de regresión, puedo obtener la concentración dicha muestra desconocida.
Materiales y metodología empleada
Para la realización de este trabajo experimental se utilizaron:
* Tubos eppendorf
* Micropipetas P200 y P1000
*Tips
* Agua destilada
* Solución stock de colorante Azul de Toluidina 0,16%p/v, 5,23x10-3M
* Placa multiwells
* Espectrofotómetro
En primer lugar, se rotularon los tubos eppendorf a utilizar. Luego, se colocaron 200µl de agua destilada en los mismos utilizando una micropipeta P200. A continuación, con una micropipeta P1000, se tomaron 200µl de colorante Azul de Toluidina y se loscolocó en uno de los eppendorf. Se prosiguió con la realización de diluciones seriadas ½ hasta la desaparición completa de color. La ezperiencia se reañizó por duplicado. Luego se colocaron 100µl de la muestra incógnita en dos tubos eppendorf.
En la placa multiwells se colocaron 100µl de cada dilución, 100µl de cada tubo de muestra incognita y 100µl de agua destilada a modo de blanco.
Acontinuación, la placa se llevó al espectrofotómetro y se obtuvieron los datos de absorvancia correspondientes.
Resultados
* Tabla de resultados del espectrofotómetro
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 |
A | 0.093 | 0.100 | | | | | | | | | |
B | 2.949 | 2.807 | 2.665 | 1.798 | 1.003 | 0.585 | 0.345 | 0.224 | 0.157 | 0.119 | 0.191 |
C | 2.984 | 2.600 | 2.665 | 1.848 |...