Discuciones

DISCUCIONES

Una de las determinaciones que se llevaron a cabo en el desarrollo de esta práctica es la cuenta viable; que es un valor que determina la cantidad de unidades formadoras de colonias en una muestra en particular, con ella realizamos el conteo de las distintas cepas donadoras y receptoras debido a que este valor es un parámetro indispensable para poder conocer la cantidad demicroorganismos revertantes y transconjugantes. Los valores obtenidos se pueden apreciar en la tabla 1, en ella observamos la similitud existente en la mayoría de los títulos para las cepas empleadas, esto es congruente debido a que en teoría los equipos partimos de las mismas muestras de las cepas, realizando la siembra bajo las mimas condiciones. Las variaciones obtenidas en esta determinación se debenal conteo de distintas morfologías coloniales ocasionadas a problemas de contaminación.

Como ya sabemos las mutaciones pueden ser originadas espontáneamente por errores introducidos en la replicación, las cepas de esta práctica pudieron ser revertantes debido a esta fuente de mutación. Como observamos en la tabla 1, solo en algunos equipos se observó la aparición de revertantes esto escongruente ya que los errores son introducidos en un orden de 10-7 a 10-10. La medición de revertantes fue realizado con el propósito de que una vez que se determine el valor de organismos transconjugantes estos no puedan ser confundidos en los diferentes medios con los organismos revertantes, es decir en el proceso de conjugación puede originar organismos prototrofos para determinado marcador, sinembargo el proceso de reversión también puede originar organismos prototrofos, con este experimento estos organismos pueden ser descartados, es decir obtenemos los transconjugantes verdaderos.

Finalmente se realizó el conteo de organismos transconjugantes provenientes de cuatro cruzas diferentes siguiendo el siguiente cuadro.

Donadora | Receptora |
F' (SmS, His-, /F, His+) | Rec + (Pro-,Trp-, His-, Lac-, SmR) |
F' (SmS, His-, /F, His+) | Rec – (Pro-, Trp-, His-, Met-, SmR) |
Hfr (SmS, B1) | Rec + (Pro-, Trp-, His-, Lac-, SmR) |
Hfr (SmS, B1) | Rec – (Pro-, Trp-, His-, Met-, SmR) |

En la primera cruza realizada por los equipos 7 y 8, con base a las características de las cepas donadoras y receptoras mostradas la tabla 8, se esperaba obtener en los organismos transconjugantesresultantes características de protrotrofía para el marcador Histidina, debido a que este gen se encuentra dentro del DNA plasmídico, con base a lo anterior se esperaba obtener crecimiento solo en medio G8, que contiene no este aminoácido. No obstante los resultados expresados en la tabla 1, nos indican crecimiento en los tres medios, que no contienen los aminoácidos codificados por los tresmarcadores que fuimos estudiando en el desarrollo de esta práctica, esto se puede explicar ya que el plásmido tiene la capacidad para integrarse y escindirse del cromosoma bacteriano, este evento ocurre de manera azarosa, y si la conjugación bacteriana ocurre en el momento en que el plásmido forma parte del cromosoma, y ya las bacterias receptoras poseen la capacidad para integrar el material genéricoexterno a su patrimonio genético, es decir son Rec+, entonces presentaran prototrofia para los marcadores que antes eran auxótrofas, esto nos explica los resultados obtenidos.

En la segunda cruza( JC4046 X KL323 ) existe congruencia entre los resultados obtenidos y lo esperado. Ya que como la célula receptora es Rec- (sin capacidad de recombinación), no podrá integrar marcas cromosomales de ladonadora a su DNA cromosómico, con esto solo será capaz de expresar los marcadores contenidos en el plásmido y los suyos, teniendo únicamente la capacidad en el medio G8, por su adquirida prototrofia a la histidina, en los resultado expresados en la tabla 6, se aprecia que esto ocurrió experimentalmente.

Al observar los resultados obtenidos de la tercera cruza notamos que la recombinación del...