Discusion


DISCUSIÓN
En la técnica de electroforesis, es importante manipular los diferentes reactivos que se necesitan, considerando los que son más eficientes, así como los costos de los mismos. En latinción con Nitrato de plata; el gel se impregna con éste y se revela por reducción con formaldehído a pH básico, permite detectar entre 5 y 10 ng de proteína. El colorante orgánico más utilizado es elAzul de Coomassie Brillante que nos permite detectar alrededor de 50 ng de proteínas por banda, pero cuando se desea obtener mayor sensibilidad se utiliza la tinción con sales de plata. La detección engeles de poliacrilamida teñidos con nitrato de plata ofrece, la mejor relación costo-beneficio, una alta resolución, requiere de equipos “poco” sofisticados. La detección mediante fluorescencia, encontraste, es costosa pues requiere de equipos sofisticados, cuya adquisición sólo se justifica en aquellos laboratorios que manejan grandes volúmenes de muestras. La detección radiactiva requiere P32,el cual es costoso. Los procedimientos de tinción con plata se basan en la reducción de la plata y se pueden agrupar en dos categorías; los métodos alcalinos se basan en el uso de plata amoniacal ocomo solución diamina. Los iones de plata forman complejos con los Ácidos Nucleicos, estos son reducidos por formaldehído en medio ácido. En el segundo grupo de métodos, se usa una solucióndébilmente ácida de nitrato de plata para embeber el gel. El revelado se logra por la reducción selectiva de los iones plata a plata metálica por formaldehído en medio alcalino. La tinción con plata esmonocromática, produciendo bandas de color marrón oscuro. La sensibilidad es su gran ventaja. Entre las desventajas se encuentra el alto costo.
Los agentes reductores como el DTT (aunque también se empleanotros reductores alternativos no cargados), completan la desnaturalización proteica por ruptura de puentes disulfuro.
Ditiotreitol, treo-2,3-dihidroxi-1,4-butanoditiol. También llamado reactivo de...