discusion

Discusión:
Se realizó la práctica satisfactoriamente no hubo ningún problema para utilizar el método de liofilización, los plásmido que uso en esta práctica de clonaje tienen el gen de resistenciaa ampicilina (bla). Este gen codifica una b-lactamasa que hidroliza el anillo b-lactámico de la ampicilina, inactivándola. (1)

La ampicilina es una aminopenicilina con actividad antimicrobiana deamplio espectro, lo cual esta Inhibe la síntesis del péptidoglicano, constituyente de la pared bacteriana, en células en fase activa de crecimiento, las bacterias que contienen este tipo de plásmidosse seleccionan creciéndolas en presencia de ampicilina como es en el caso de la bacteria E.coli.

Para poder diferenciar las bacterias transformantes que se han incorporado el plásmido recombinantede las que han incorporado el plásmido sin inserto se pueden usar varios métodos. Uno de los más utilizados es el de la complementación del fragmento a de la b-galactosidasa, este método consiste enque requiere que el vector usado contenga el sitio de policlonaje dentro de la región codificante del fragmento a (como el plásmido pBluescript pero no así el plásmido pRSET-T7,) y la bacteria huéspedexprese el otro fragmento de la b-galactosidasa necesario para la complementación (lacZM15; presente normalmente en el profago f80 o en F´). En los plásmidos recombinantes, la incorporación delinserto inactiva el fragmento a de forma que las bacterias que contienen estos plásmidos carecen de actividad b-galactosidasa, originando colonias blancas en un medio de cultivo que contiene el sustratoincoloro X-gal, las bacterias transformadas con plásmidos sin inserto aparecen como colonias azules en este medio. (2).

Referencias:
(1), (2).- Manual de Practicas Biología Molecular de la CélulaL Claudia Andrea Segal Kischineavzky, Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de Ciencias.

Sierra José M. (24/10/07) CLONAJE DE GENES EN PLÁSMIDOS BACTERIANOS: Transformación de...