Diseño de primers

LABORATORIO 5.

DISEÑO DE PRIMERS

POLYMERASE CHAIN REACTION (PCR)

RESUMEN

La reacción en cadena de la polimerasa, ya más conocida como PCR, es una técnica que permite replicarentre cientos de miles y millones de veces, e in vitro, pequeñas cantidades de ADN. Uno de los aportes fundamentales de esta metodología a la investigación, precisamente es la rapidez y eficienciamediante las cuales se realiza. El producto que se obtiene al finalizar la reacción es una gran cantidad de un fragmento génico con alto grado de pureza lo que favorece la tarea de conocer sobre laestructura y función de los genes. Esta guía es una aproximación, más o menos detallada, al diseño de prímers por medios informáticos. En la primera parte revisaremos algunos conceptos generalespertinentes a este tema. INTRODUCCIÓNLa importancia de esta actividad radica en que aumenta la fidelidad de la replicación del ADN original. Sin embargo, se trata de una enzima termolábil por lo que no soportalos ciclos y temperaturas utilizados en una PCR. Esta técnica se fundamenta en la propiedad natural de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN, para lo cual emplea ciclos de altas y bajastemperaturas alternadas para separar las hebras de ADN recién formadas entre sí tras cada fase de replicación y, a continuación, dejar que vuelvan a unirse las polimerasas para que vuelvan a duplicarlas.Puesto que las temperaturas del ciclo (95 °C en las fases de desnaturalización del ADN) suponen la inmediata desnaturalización de toda proteína, se emplean ADN polimerasas termoestables, extraídas demicroorganismos adaptados a vivir a esas temperaturas, restrictivas para la mayoría de los seres vivos. |
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MATERIALES

* PC
* Basede datos
Las secuencias a emplear en este laboratorio corresponden al gen RNAasa P RNA
* Software
El software de biocomputación BioEdit©


PROCEDIMIENTO

CONSECUCIÓN Y...