Diseño De Primers

INTRODUCCIÓN.

Es posible sintetizar a voluntad ácidos nucleicos de secuencia definida y de una forma totalmente automatizada en cuestión de unas pocas horas (Narang,1983). Típicamente las secuencias sintetizadas conocidas como “oligonucleótidos” corresponden a DNA de cadena sencilla con un tamaño que no suele exceder las 60 bases.
Losoligonucleótidos son normalmente encargados a empresas o bien en el caso de que se disponga de un sintetizador, sintetizados automáticamente en el propio laboratorio. Los usos dela síntesis de oligonucleótidos son múltiples: PCR, síntesis de genes, óligos para secuenciación, sondas moleculares, adaptadores o linkers, mutagénesis dirigida o estudiosestructurales de ácidos nucleicos (Oliva y Vidal, 2006).
Características necesarias para el diseño de oligonucleótidos (Serrano y García, 2012):
* Tamaño deloligonucleótido
* Temperatura de fusión
* Especificidad
* Secuencias complementarias
* Contenido en G/C y segmentos de polipirimidinas (T,C) o polipurinas (A,G).
*Secuencia 3’ terminal.
* Secuencia 5’ y regiones centrales.
Existen paginas de internet que nos permiten desarrollar los primers de los oligonucleótidos a utilizar,algunas de estas son: Oligo perfect design, Israel Science and Technology Homepage y en NCBI con la herramienta de primer blast.
OBJETIVO GENERAL.

* Que el alumno adquieralos conocimientos necesarios para la síntesis de oligonucleótidos específicos para la elaboración PCR.

DESARROLLO.
Se obtuvo la secuencia de proteína calpaina 10 pormedio de la página del NCBI.

Secuencia de núcleotidos para Calpaina 10

>gi|305855092|ref|NM_023085.3| Homo sapiens calpain 10 (CAPN10), transcript variant 3, mRNA...