Diseño Experimental Del Agua

MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

PRACTICA Núm. 16 RECUENTO DE BACTERIAS MESOFILAS AEROBIAS EN AGUA PARA CONSUMO HUMANO I. OBJETIVO Determinar la presencia de bacterias Mesófilas Aerobias en una muestra de agua potable por la técnica de placa vertida. II. INTRODUCCION De todos los tipos de contaminación del agua. contaminación ambiental, puede destacarse la

Muchas v eces el aguapuede ser completamente transparente, incolora e inodora, pero estar aun contaminada, por lo que, es importante determinar su calidad sanitaria. La potabilidad del agua sólo se puede determinar mediante análisis químicos y bacteriológicos. Los procedimientos bacteriológicos de rutina son: Recuento de Bacterias Mesófilas Aerobias, Coliformes Totales, Coliformes Fecales, Estreptococos Fecales yClostridios Sulfito Reductores. Los recuentos de Mesófilos Aeróbicos en placa son útiles para determinar la potabilidad de un agua, así como también la eficiencia de las operaciones para eliminar microorganismos, como la sedimentación, filtración y cloración. Las cuentas se deben hacer antes y después del tratamiento específico. Los resultados indicarán la medida en que ha sido reducida la poblaciónmicrobiana. Lo usual es que el agua de buena calidad, para consumo humano, tenga cuentas bajas: < 100 UFC por mililitro. La determinación del conteo de bacterias mesófilas aerobias en una muestra de agua se realiza, normalmente, por siembra en una placa, de un volumen determinado de agua, por incubación a una temperatura concreta y en un tiempo determinado, y por recuento posterior de las coloniasdesarrolladas y con la aceptación implícita de que cada colonia es originada por una bacteria de la

97

MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

muestra inicial, por lo tanto, el número de colonias equivaldrá al número de bacterias en el volumen sembrado. III. MATERIALES Y SUBSTANCIAS − Muestras de agua potable de diferente origen (Grifo, purificada y embotellada u otro), de unvolumen mínimo de 100 mL obtenida en recipiente estéril y con Tiosulfato de Sodio al 10%. − 3 tubos de ensayo conteniendo c/u 9 mL de agua de dilución estéril. (Apéndice C) − 9 tubos de 20 x 160 mm, con tapón conteniendo c/u de 15-20 mL de agar cuenta estándar estéril, manteniéndolo a 45-47 °C en baño de temperatura constante. − Gradilla. − Pipetas estériles de 1 mL graduadas en décimas. − 9 cajas Petriestériles. − Mechero Bunsen. − Cerillos ó encendedor. − Incubadora. − Contador de Colonias Quebec. IV. TECNICAS En condiciones asépticas: 1. Agitar vigorosamente la muestra de agua, para homogeneizar. 2. Pipetear 1 mL de muestra y verterlo en el primer tubo con 9 mL de agua de dilución estéril, quedando entonces una dilución de 10-1. (Fig. 16.1) 3. Agitar para homogeneizar y tomar 1 mL de estadilución (10-1) y verterlo en el segundo tubo, quedando una dilución de 10-2. 4. Agitar para homogeneizar y tomar 1 mL de esta dilución (10-2) y verterlo en el tercer tubo, quedando una dilución de 10-3. 5. Utilizando pipeta estéril, tomar 1 mL de la dilución 10-1 y verterlo en la caja Petri estéril marcada con 10-1, distribuyéndolo bien en el fondo de la caja Petri vacía. (Fig. 16.1)

98MICROBIOLOGIA APLICADA Manual de Laboratorio

Efectuar esta misma operación por triplicado. 6. De la misma manera, tomar 1 mL de la dilución 10-2 y verterlo en la caja Petri marcada con 10-2. Efectuar esta misma operación por triplicado. 7. Hacer lo mismo con el tubo de la dilución 10-3 y la caja marcada con 10-3. Efectuar la misma operación por triplicado. Es recomendable usar una pipeta estérilpara cada dilución. 8. Antes de que pasen 10 minutos, agregar a cada caja Petri el medio de cultivo contenido en un tubo, a una temperatura máxima de 47 °C (todavía líquido). NOTA: Si la temperatura del agar es superior a 47°C al vaciarlo a las cajas, puede producirse la destrucción total ó parcial de las bacterias sembradas. 9. Antes de que el medio de cultivo solidifique homogeneizar cada caja...