Diseño De Un Método Molecular Para La Identificación De Las Subespecies Específicas De Klebsiella Pneumoniae Utilizando El Gen 16Ssubunidad Ribosomal

Diseño de un método molecular para la identificación de las subespecies específicas
de Klebsiella pneumoniae utilizando el gen 16Ssubunidad ribosomal
NELSON ENRIQUE ARENAS, MSC 1 , JUAN CARLOS POLANCO, PHD2 , SANDRA MILENA CORONADO, MSC 1 , CLARA JULIANA DURANGO, QUIM 1 , ARLEY GÓMEZ, PHD1, 3
RESUMEN
Introducción: Rinoscleroma es causada porKlebsiella pneumoniae rhinoscleromatis y lasinfecciones causadas por ocena K. pneumoniae ozaenae, tanto las infecciones afectan el tracto respiratorio superior. En las fases clínicas primero los síntomas son inespecífica, y la enfermedad se puede diagnosticar como un resfriado común, por lo tanto, la terapia antimicrobiana no se alcance efectivo los resultados y los pacientes deben ser el seguimiento durante varios años ya que la infección sehizo crónica.
Objetivo: identificar subespecies Klebsiellamediante un ensayo específico basado en la restricción de los amplificados de un gen que codifica la subunidad 16S ribosomal (rDNA16S).
Metodología: patrones de restricción específicos se generaron, el uso de secuencias informó derDNA16S genes y la bioinformática programas de guacamayo, ZFP, GeneDoc y GENE RUNNER. Ensayos de amplificación yrestricción fueron estandarizadas.
Resultados: Las predicciones in silico puede proponer un algoritmo para las especies deKlebsiella y la identificación de las subespecies. Dos cepas de referencia y se incluyeron dos cepas clínicas que se biotyped e identificados por el método propuesto. rDNA16S los patrones de restricción del gen mostraron diferencias con respecto a las especies identificadasinicialmente por los métodos convencionales. Además dos patrones de bandas se observaron en K.pneumoniae rhinoscleromatis, lo que indica la presencia de polimorfismos en el
rDNA16S gen.
Conclusiones: Se confirmó la dificultad para identificar K. pneumoniae subespecie por métodos convencionales. Ejecución de esta técnica podría permitir una diferenciación precisa y rápida entre K. pneumoniae y K.pneumoniae ozaenae
rhinoscleromatis agentes etiológicos de las dos infecciones con frecuencia mal diagnosticada. La terapia antimicrobiana por lo general puede ser ineficaz, sobre todo en pacientes crónicos. Por último, se considera muy importante ampliar el estudio mediante el uso de más clínicas y cepas de referencia.
Palabras clave: Klebsiellapneumoniaerhinoscleromatis, K. pneumoniae ozaenae, K.pneumoniae pneumoniae; Diagnóstico
Diseño de un método molecular para la identificación específica de Klebsiella pneumoniae a nivel de subespecie, usando el gen que codifica para la subunidad ribosomal 16S

RESUMEN:
Introducción: El Rinoscleroma es causado por Klebsiella pneumoniae rhinoscleromatis y la ocena por Klebsiella pneumoniae ozaenae respectivamente. Estas infecciones se presentansobre todo en el tracto respiratorio superior y tienen una sintomatología inespecífica en sus fases iniciales por lo cual se pueden confundir con el catarro común. Las dificultades de establecer un diagnóstico oportuno tienen repercusiones negativas en la terapia antimicrobiana, porque puede no ser efectiva y hacer que la enfermedad evolucione a una fase crónica cuyo seguimiento puede implicar muchosaños.
Objetivo: Diseñar un ensayo molecular para la identificación a nivel de subespecie de bacterias del género Klebsiella basado en restricción de ampliaciones del gen que codifica para la subunidad ribosomal 16S (ADNr 16S).
Metodología: Se generaron patrones de restricción específicos, utilizando secuencias informadas del gen ADNr 16S y los programas bioinformática MACAW, PFE, GENEDOC yGENE RUNNER. Se estandarizaron las condiciones para la amplificación y restricción para el ensayo experimental.
Resultados: Las predicciones in silico permitieron proponer un algoritmo para la identificación a nivel de especie y subespecie de las especies del género Klebsiella. Se incluyeron dos cepas de referencia y dos aislados clínicos, que se biotipificaron e identificaron por el método...