dna cuantificacion







INTRODUCCION.
El ácido desoxirribonucleico (DNA) es un biopolimero lineal dextrógiro bicatenario complementario formado por desoxirribonucleotidos.
Los ácidos nucleicos son moléculas esenciales para las funciones de las células, en todas las células existen dos tipos de ácidos nucleicos el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA), en el DNA se localiza lainformación genética de la célula mientras que diferentes moléculas de RNA forman parte del mismo o que traduce esta información en las proteínas que determinan la estructura y la función celular.
La molécula de ADN tiene cuatro bases nitrogenadas: Adenina, Guanina, Citosina y Timina y una estructura de azúcar y fosfato arreglada en dos tiras conectadas que forman una doble hélice.
En elaislamiento de ácidos nucleicos debe tomarse en cuenta lo siguiente, se debe romper eficazmente la pared y membrana celular para facilitar la extracción del ácido nucleico deseado.
Los tipos de DNA: Mitocondrial es propio de la mitocondria, DNA Plasmídico el cual es un DNA circular covalentemente cerrado, DNA cromosomal, el que se encuentra en los cromosomas.

ANÁLISIS DE LA TÉCNICA DEOBTENCIÓN DE DNA DE GUAYABA.
Para la obtención del DNA de guayaba utilizamos diversos reactivos , para empezar utilizamos Tris/EDTA/NaCl , el Tris el cual tiene un pH de 8 – 8.5 nos ayuda a mantener el pH para mantener la carga negativa del DNA, mientras que el EDTA es un agente quelante que actúa inactivando las nucleasas pues forma un complejo con cationes divalentes los cuales son cofactores delas nucleasas y al estar quelados dichas enzimas no podrán degradar al DNA; mientras que el NaCl es el cofactor de la amilasa que fue el siguiente reactivo adicionado el cual degrada el almidón.
Posteriormente adicionamos solución de NaCl saturada esto es para que dicha solución tenga un efecto de salting out que precipitará a algunas de las proteínas presentes, hasta la adición de estosreactivos hemos estado preparando el medio en el cual se liberará el DNA puesto que aun esté no ha salido de la célula, el siguiente reactivo utilizado es el SDS que disgrega las membranas para ahora sí liberar el DNA el cual se aislará cuando la muestra junto con todos los reactivos, el homogeneizado se filtra con el propósito de deshacerse de los detritos de la ruptura de las células. Al filtrado sele agrega una mezcla de cloroformo: alcohol isoamílico, además de darle una agitación vigorosa, con la finalidad de resquebrajar las histonas y desenrollar el DNA. Posteriormente re realiza un centrifugado a la mezcla, para separar lo mejor posible al DNA de los elementos celulares con los que está mezclado aún (proteínas, almidón), finalmente se recupera el sobrenadante y se vierte en etanol,para precipitar al DNA obtenido.

OBJETIVOS

Realizar un procedimiento de purificación del DNA.
Obtener el espectro de absorción característico del DNA.
Realizar la cromatografía en placa fina para la identificación de las bases nitrogenadas que conforman los ácidos nucleicos.








RESULTADOS
Tabla 1. Lecturas de absorbancia a distintas longitudes de onda del DNA.Figura 1. Espectro de absorción de DNA.


Otros datos del DNA:
Pureza del DNA= 1.12
Cantidad de DNA en la muestra calculado por nomograma= 0.075 mg/ml
Cantidad de DNA en la muestra calculado mediante la fórmula C=/22500 x factor de dilución fue de 1.137 x 10-4 g/ ml lo cual es 0.113 mg/ml
Cantidad de DNA en la muestra calculadomediante regla de tres:
A260 – 50 μg / ml
0.512 –X
X= 25.6 μg / ml lo cual es 0.0256 mg/ml

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

A una muestra de DNA se le midió su espectro de absorción y en las lecturas se obtuvo que el DNA presenta una mayor absorbancia a una longitud de onda de 260 nm, el cual es característico para el DNA.
A partir de las lecturas a 260 nm y 280 nm (mayor absorción de las las...