dna humano

Código

GLA-01 V. 00

Página

Guía Unificada de Laboratorios

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AUTOR: JORGE CONTRERAS PINEDA
1.

Titulo: Extracción de DNA humano

2.

Objetivo: Estudiar y aplicar los principios básicos necesarios para la extracción y
purificación de DNA a partir de leucocitos humanos.

3. Marco teórico
En los cursos teóricos, los estudiantes discuten los conceptos de gen, susubstrato
material, características biológicas, biofísicas y bioquímicas. Con base en los
grandes desarrollos realizados por la Biología Molecular y su repercusión en el nuevo
enfoque que ha generado en áreas como la Medicina, obliga a los profesionales en
esta área a entender los procesos a este nivel para su adecuada interpretación y
manejo. Adicionalmente, los avances han revolucionado lastecnologías de estudio y
diagnóstico preventivo y curativo de las enfermedades. Con base en lo anterior, se
hace necesario reforzar el trabajo de docencia teórico, aplicando algunas propiedades
tanto químicas como físicas, en este caso de los ácidos nucleicos, para lograr una
mejor conceptualización.
Dentro de algunos conceptos que pueden ser reforzados mediante la realización de
este laboratorio,tenemos:
- El hecho de que el DNA se encuentra localizado en el núcleo de las células
eucarióticas y por lo tanto solo puede ser obtenido de células nucleadas.
- Las células de un organismo eucariótico multicelular no presentan diferencias
de tamaño ni secuencia de su DNA, las diferencias se presentan es a nivel de
expresión genética, por lo tanto, si se quiere conocer o estudiar el DNA de unindividuo lo podemos hacer a partir de cualquiera de sus células nucleadas.
- La sangre tiene un componente particulado compuesto por células, en su
mayoría son eritrocitos, los cuales durante su desarrollo pierden el núcleo. Además de
los eritrocitos en la sangre tenemos glóbulos blancos, células con núcleo y que por lo
tanto nos pueden servir para obtener DNA.
- Debido a la expresióngenética diferencial en los diferentes tipos de células,
estas presentan diferencias en su estructura, propiedades biológicas y propiedades
físicas y químicas, con base en esto, se sabe que las células sanguíneas presentan
diferencias de densidad y características de membrana y que estas diferencias se
pueden utilizar para separarlas mediante técnicas de centrifugación y hacer lisis
diferencial dedichas células.
- Conocer la naturaleza química y tipo de interacciones entre los componentes
de las macromoléculas que constituyen las células permite la aplicación de técnicas
para su separación.

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AUTOR: JORGE CONTRERAS PINEDA
La materia presenta diferencias en densidad. Utilizando técnicas como lacentrifugación podemos
aprovechar las diferencias en densidad y separar
componentes. En la sangre podemos separar los componentes particulados (células)
del no particulado (plasma). Adicionalmente, por diferencias en densidad podemos
separar los glóbulos rojos de los blancos.
Teniendo los glóbulos blancos medianamente separados de los rojos se aprovecha las
diferencias en los componentes de lamembrana y capacidad entre estas células. Por
dicha diferencia, los glóbulos rojos son más sensibles a un ambiente hipotónico. Al
colocar los glóbulos blancos y rojos en una solución hipotónica, los segundos se lisan
mientras los primeros permanecen intactos.
Una vez se tienen los glóbulos blancos completamente purificados de los rojos, se
procede a separar las diferentes macromoléculas de estascélulas. Se utilizan las
diferencias de polaridad. Por la presencia de grupos fosfato los ácidos nucleicos son
altamente polares y por lo tanto solubles en soluciones acuosas. Los lípidos son
apolares y por lo tanto solubles en solventes no polares como fenol y cloroformo e
insolubles en soluciones acuosas. Las proteínas son polímeros de aminoácidos,
algunos polares y otros no polares. Las...