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Guillermo Serrano Sanz 48717886E 23/10/2012

INFORME DE LAS PRÁCICAS DE APLIACIÓN A LA MICROBIOLOGÍA

Para realizar un análisis microbiológico, se han de tomar muestras de manera aséptica, para no aumentar artificialmente la carga de microorganismos.
La fracción de alimentos a analizar, deben serrepresentativas de la totalidad del lote a analizar, además, estas fracciones que se van a analizar, deben contener fracciones de superficie y de profundidad de forma proporcional.
Estas muestras, se diluyen a una concentración 1:10 en una solución de triptófano y sal (TS), y en agua de peptona tamponanada; se realiza con estos diluyentes, ya que no afectan cualitativamente o cuantitativamente, esdecir, que no altera a los microroganismos, ni favorece ni inhibe su crecimiento.
Esta solución, llamada solución madre, se introduce en el Stomacher, para homogeneizar la muestra.

PRÁCTICA 1. Identificación y recuento de estafilococos coagulasa positivos CPS (Staphylococcus aureus).

Sembramos por profundidad directamente de la solución madre una placa Agar Baird-Parker y suplementadocon RFB y Yema de huevo + Telurito potásico. Posteriormente, a partir de la solución madre, realizamos un banco de diluciones decimal, y sembramos en profundidad cada dilución en una placa Agar Baird-Parker.
Dejamos incubar durante 24 horas a 37ºC, y observamos crecimiento de colonias.
Identificamos las colonias que pertenecen a Staphylococcus aureus por su morfología, ya que son coloniasredondas, pequeñas, de bordes lisos, convexas, negras, con borde blanco y rodeadas de una zona opaca y de un halo claro de 2-5 mm. Retenemos las placas con un máximo de 300 ufc de estas colonias.

Dilución | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 |
UFC | 233 | 36 | 4 | 2 | 0 |



N=2690.1(1+0.1×1)10-1N=2.44x104 ufc/gr
En cada gramo de alimento estudiado, hay 2.44x104 unidades formadoras de colonia de Staphylococcus aureus. Al poner en común las placas obtenidas en clase, se calculan 2.21x104 ufc/gr.
Para confirmar que estas colonias son de Staphylococcus aureus, realizamos unos análisis:
-Prueba de la catalasa : colocamos una muestra de las colonias en un porta, y depositamos unas gotas deH2O2, si observamos una efervescencia se pone en evidencia la presencia de catalasa que descompone el agua oxigenada en agua y O2.
-Prueba de la termonucleasa: se siembran las colonias sospechosas en una placa agar DNasa con tres estrias radiales, se incuba 24 horas a 37ºC, y posteriormente se le añade HCl a 1N, si se observa un aclaramiento alrededor de las colonias, indica que haydesoxirribonucleasa termorresistente (termonucleasa) cuya presencia está estrechamente relacionada con la producción de enterotoxinas estafilocócicas.
Tras realizar estas pruebas, podemos confirmar que las colonias estudiadas se tratan de colonias de Staphylococcus aureus.

PRÁCTICA 2. Investigación y recuento de Bacillus cereus.

Sembramos en superficie con la ayuda de un asa de vidrio 0.1 ml dela solución madre en un medio selectivo para Bacillus cereus suplementado con sulfato de polimixina y yema de huevo. Posteriormente, a partir de la solución madre, realizamos un banco de diluciones decimal, y sembramos en superficie con un asa de vidrio cada dilución en una placa con un medio selectivo para Bacillus cereus suplementado.
Dejamos incubar a 30ºC durante 24 h, y observamos elcrecimiento de colonias.
Identificamos las colonias que pertenecen a Bacillus cereus por su morfología, ya que son grandes, lisas, rosadas de entre 2 y 3 mm. Las colonias de más de 24 h son rugosas, rizoides y con estrías. Retenemos para los cálculos, las placas con un numero de colonias entre 15 y 150.
Dilución | 10-1 | 10-2 | 10-3 | 10-4 | 10-5 |
UFC | + 150 | +150 | +150 | 55 | 2 |...