Dragón nube es muy fuerte

Desnaturalización.
La primera reacción consiste en la desnaturalización del DNA, separándose las dos
cadenas por ruptura de los enlaces de hidrógeno.
Las condiciones típicas de desnaturalizaciónson 95ºC por 30 segundos, o 97ºC por
15 segundos; sin embargo temperaturas más altas pueden ser apropiadas especialmente para
templados ricos en G + C.
La desnaturalización incompleta permite elapareamiento de las hebras de DNA y
por lo tanto se reduce el rendimiento el producto. En contraste, los pasos de
desnaturalización a altas temperaturas o por mucho tiempo provocan perdida de laactividad
de la enzima.

Alineamiento.
La segunda reacción consiste en la hibridación de los primers. Para ello se baja la
temperatura y las condiciones serán tales que se facilitará la unión de losprimers a las
cadenas.
La temperatura y el tiempo requerido para el alineamiento de los primers depende
de la composición, tamaño y concentración de los primers amplificadores. Una
temperatura dealineamiento óptima es 5ºC por debajo de la Tm de los primers. Debido a
que las DNA polimerasas son activas en un amplio rango de temperaturas, la extensión de
los primers puede ocurrir a bajastemperaturas incluyendo el paso de alineamiento. El rango
de actividad de las enzimas varia en dos ordenes de magnitud entre 20 y 85ºC. Las
temperaturas de alineamiento en el rango de 55 a 72ºC generabuenos resultados.
Extensión.
La tercera reacción se efectúa a 72º C, temperatura a la cual, la polimerasa lleva a
cabo su acción, insertando los diferentes nucleótidos complementarios en el ordenque le va
indicando la cadena que actúa como molde.
El tiempo de extensión depende de la longitud y concentración de la secuencia
blanco y de la temperatura. La extensión del primer se realizatradicionalmente a 72ºC.
Las estimaciones para la tasa de incorporación de nucleótidos a 2ºC varia de 35 a 100
nucleótidos por segundo dependiendo del buffer, pH, concentración de sales y la naturaleza...