Educacion Sanitaria


Técnicas inmnologicas e inmunodiagnosticas

Pruebas diagnosticas se basan complejo antigeno-anticuerpo
Podemos agrupar las técnicas en inmunoensayos: test Elisa, inmunoradio ensayo (radio isotopo)
Inmunoestoquimica
Inmunofluorescencia

Prueba de Elisa: es un ensayo asociado a actividad enzimática.

Elisas directos; quiere decir que hay un ac que esta detectando a un antígenoespecifico.
Elisa indirecto; funciona por estar buscando la respuesta a un antígeno, primero voy a trabajar con una placa que tiene antígenos, sensibilizo la placa ( la cubro de ag.) luego se toma una muestra para ver si hay ac que respondan a ese Ag por lo tanto voy a incubar la muestra (suero), luego se trata de evidenciar donde esta el ac especifico , se agrega un Ac que reconoce a la porción Fcde los Ac de mi muestra. (necesito ac que reconozca ac) asociado a actividad enzimática, luego de la reacción Ag-Ac agrego mi nuevo Ac y se va a a producir la unión especifica entre mi antiAnticuerpo (conjugado con una enzima) y el anticuerpo de mi muestra y luego yo lo que tengo que hacer es agregar al sustrato de esa enzima, y el resultado es coloreado y por lo tanto se ven apariciones decolores lo observo en una maquina de espectrofotómetro, llamado vulgarmente lector de Elisa. Depende de la intensidad de la luz lo llevo a una concentración de Ac. La reacción especifica esta entre mi antígeno y la mestra, ahora la reacción entre el antianticuerpo y el ac de la muestra esa reacción no es especifica. Por lo tanto lo que hay que hacer es lavar que me aydan a eliminar toda unióninespecífica . este lisa indirecto me sirve para evaluar la presencia fundamentalmente de Ac específicos contra algún Ag especifico que me interese . aparición de color se interpreta como : hay ac contra ese ag especifico .

Elisa sándwich ( de captura): no evalua la presencia de Ac sino de Ag. (casi siempre de Ag)
tomo una placa de 96 posillos sensibilizo con Ac, luego tomo una muestra para incubarlacon este posillo. Las muestras que se ocupan o es suero, o es sangre, u orina(poco probable), muestras de leche. Una vez que tomo la muestra sospechosa y la someto a las placas sensibilizadas. Si esque hay Ag se unirán a mi Ac . unión especifica y muy fuerte. Después se lava para barer con señales de interferencia que pueden estar presente. Luego agrego un nuevo Ac que va a ser especifico con elAg, pero este esta conjugado con una enzima , se unira al Ag que quedo fijo en la reacción anterior. (antígeno entre ds anticuerpos), vuelvo a lavar, posteior agrego el sustrato para la enzima, si hay unión especifica, se producirá reacción coloreada. Y la intensidad de color estará directamente relacionada con la concentración de antígeno. Si no tengo color, es porque no hay unión, es decirausencia de Ag.

Elisa de competencia: lo que utilizamos es un Ac o puede ser un Ag que esta fijo al posillo. Que es lo que ocurre si este Ac yo lo someto a una muestra que se supone tiene Ag, se va a producir una respuesta especifica, entonces luego quiero ver si mi muestra tiene ac, si tiene ac se producirá una reaccion especifica pero si esa muestra no tiene ac yo tengo un paso adicional que esagregar ac especifico contra el antígeno marcado con la enzima en ese caso la unión se va a producir tanto en mi anticuerpo especifico conjugado con la enzima y mi anticuerpo presente en la muestra van a competir por los sitios de unión de antígeno y por lo tanto se va a producir una mezcla , si la muestra no tuviera ac todos los ac marcados se unirían en forma especifica a mi ag de laboratorio. pero si mi muestra tiene ac van a competir con los ac marcados que pasa si después de varios lavados yo agrego el sustrato? si esque hay anticuerpos específicos en mi muestra no se va a producir color. Quiere decir que todos los sitios de unión de ese ag están ocupados por los ac de mi muestra y por lo tanto ninguno de los anticuerpos conjugados con La enzima pudieron reaccionar con el...