Efecte de la concentració de l'enzim sobre l'activitat enzimàtica

PRÀCTICA 1
EFECTE DE LA CONCENTRACIÓ DE L’ENZIM SOBRE L’ACTIVITAT ENZIMÀTICA
OBJECTIUS
- Analitzar la velocitat d’acció d’un enzim en funció de la seva concentració
- Treballar els conceptes de concentració, dilució, prova control, etc.
PROBLEMA A INVESTIGAR
Com influeix la concentració de l’enzim sobre l’activitat enzimàtica?
HIPÒTESI
Potser a major concentració d’enzim, més velocitatd’acció de l’enzim.
VARIABLES
Dependent: L’activitat enzimàtica
Independent: La concentració d’enzim
Controlades: Lugol, temperatura, aigua destil·lada
MATERIAL

-Balança
- Morter
- Vas de precipitats
- Cronòmetre
- Pipeta i pipum
- Bureta
-Pastilla de Pancreoflat
- Vareta
-Tubs d’assaig
-Aigua destil·lada
-Midó soluble
-Lugol
-Retolador
-Suport pels tubs d’assaigPROCEDIMENTS
A) Preparació de la solució enzimàtica
1 – Preparem la solució mare de l’enzim, triturant en un morter una pastilla de pancreoflat que conté l’enzim alfa-amilasa i diluint-la en 100 ml d’aigua destil·lada.
La concentració d’alfa-amilasa a la solució mare en UPh/l és de 60000 UPh/l ja que: 6000UPh/100 ml * 1000ml/1dm cúbic.
- Travessem la solució mare a un vas de precipitats i el retolem.-Agitem amb una vareta el vas de precipitats fins que la pols de la pastilla estigui totalment dissolta.
2 - Preparem les solucions de treball a partir de tres dilucions de la solució mare
- Per fero, agafem primerament 8 tubs d’assaig i els retolem de l’1 al 4. A cadascun dels tubs i preparem les solucions de treball següents (ho fem per duplicat):
-Solució 1: 5ml de la solució mare
- Solució2: 2.5ml de la solució mare més 2.5 ml d’aigua destil·lada
- Solució 3: 1ml de la solució mare més 4 ml d’aigua destil·lada
-Solució 4: 5 ml d’aigua destil·lada
TAULA 1 (RESULTATS)

ml S.M
Ml H2O d
Volum final
Concentració UpH/l
Observacions
Solució 1
5
0
5
6000

Solució 2
2.5
2.5
5
300

Solució 3
1
4
5
1200

Solució 4

5
5
0


B) Preparació de la solució de midó1) Preparem 100 ml d’una solució de midó al 0.5%. És a dir, abans pesem utilitzant un vas de precipitats 0.5 grams de midó soluble a la balança i després els diluïm en 100 ml d’aigua destil·lada calculats amb una bureta . Com que el midó es poc soluble convé tenir la solució en constant agitació.
2) Agafem 8 tubs d’assaig i els retolem de l’1 al 4 (ho fem per duplicat). A cada un dels tubs iposem 10 ml de la solució de midó utilitzant una pipeta per mesurar el volum. Un cop tenim col·locat tot el midó, afegim 2 gotes de lugol a cada un dels tubs. És important que tots els tubs tinguin el mateix.
RESPOSTES A LES PREGUNTES (abans de procedir a la prova final)
- Observem que la coloració de tots els tubs d’assaig és blau marí.
- Creiem que quan afegim els 5 ml de solució enzimàtica ala solució de midó, els enzims que contenia la pastilla hidrolitzaran el midó. Per tant, no es detectarà el midó ja que es formarà glucosa i desapareixerà visualment el color blau marí que ens indica que hi ha midó quan utilitzem el lugol.
- Creiem que com més concentració d’enzim hi hagi, l’increment de velocitat d’acció serà major.
C) Realització de la prova
1) És important agitar el tub ambforça per tal de redisoldre el midó que hagi precipitat abans d’afegir la solució enzimàtica ja que és poc soluble. Afegim els 5 ml de la solució enzimàtica 1, al tub d’assaig que conté la solució de midó retolat amb el nº1. Agitem el tub i cronometrem el temps que triga en desaparèixer la coloració violeta, anotant el temps.
2) Repetim el pas anterior amb la resta de tubs
3) Fem el duplicat,seguint el mateix procediment.
TAULA 2 (RESULTATS)
TEMPS QUE TRIGA EN DESAPARÈIXER LA COLORACIÓ VIOLETA

Rèplica 1
Rèplica 2
Observacions
Solució 1
3’37’’
58”

Solució 2
5’45”
4’13”

Solució 3
10’15”
8’10”

Solució 4
INF
INF


Valoració dels resultats
Tal i com mostren les dades del temps que triga en desaparèixer la coloració violeta per a cada solució, podem concloure...