Efecto de la inventadasa sobre la inexistasa

UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
SEDE MEDELLÍN
FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE QUIMICA


EXTRACCIÓN DE LA TIROSINASA Y DETERMINACIÓN DE SU ACTIVIDAD EN ALGUNOS VEGETALES.OBJETIVOS:

• Extraer la enzima tirosinasa de diferentes fuentes (banano, manzana y papa).
• Determinar la actividad de la tirosinasa, usando como sustrato L-DOPA.
• Comparar laactividad de la enzima en diferentes fuentes y bajo diferentes condiciones: calentamiento y en presencia de un inhibidor (NaCN).

MARCO TEORICO.


1 PARDEAMIENTO ENZIMATICO.

Lacoloración café oscuro que se va formando en la superficie de algunas frutas y vegetales cuándo se cortan, se denomina pardeamiento, y se debe a la acción de la enzima tirosinasa sobre elaminoácido tirosina, que en presencia de oxigeno, lo va convirtiendo secuencialmente en dopa, dopaquinona y dopacromo (café oscuro), hasta que termina en un pigmento muy oscuro llamadomelanina.






La secuencia de reacciones es la siguiente:




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En esta práctica se pretende extraer la enzima tirosinasa de varias fuentes vegetales (banano, manzanay papa), y ponerla a actuar sobre el sustrato L-dopa, que se usa como droga antiparkinsoniana, hasta convertirlo en el compuesto dopacromo, que es de color café oscuro; laconcentración de éste se puede seguir fotocolorimétricamente a una λ de 420 nm. que es donde presenta su máxima absorción.


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La medida de la absorbancia a través del tiempo sirve paracuantificar la velocidad de la reacción en términos de la cantidad de dopacromo que se va formando, o de L-DOPA que va reaccionando:


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2 OBTENCION DE EXTRACTOS ENZIMATICOS.Se conoce como extracto enzimático a una fracción de material animal, vegetal o microbiano, que contiene una mezcla de varias sustancias pero que se caracteriza por presentar ac