Efecto temperatura cinética enzimática

Efecto de la temperatura.
Tubo | 4ºC | 25ºC | 50ºC |
Sustrato | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
Amortiguador pH 7.5C/EDTA | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
Amortiguador pH | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
Enzima | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
Absorbancia (nm) | 0.416 | 0.366 | 0.402 |
Tabla 4. Efecto de la temperatura en la cinética de transminación; con EDTA en el amortiguador.
Tubo | 4ºC | 25ºC | 50ºC |
Sustrato | 0.2 | 0.2 |0.2 |
Amortiguador pH 7.5S/EDTA | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
Amortiguador pH | 0.8 | 0.8 | 0.8 |
Enzima | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
Absorbancia (nm) | 0.300 | 0.386 | 0.412 |
Tabla 5. Efecto de la temperatura en la cinética de transminación; sin EDTA en el amortiguador.
Análisis de resultados
11. Construir la gráfica de temperatura vs. Vo.
Tubo | Absorbancia | [Pirúvico]µ M | Voµ M/min |
4ºC | 0.416| 586.606386 | 19.5535462 |
25ºC | 0.366 | 515.964962 | 17.19883206 |
50ºC | 0.402 | 566.826787 | 18.89422624 |
Tabla 6. Resultados obtenidos en efecto de temperatura, empleando EDTA en el amortiguador.

Figura. Efecto de la temperatura, empleando EDTA en el amortiguador.
Observando la gráfica donde se muestra que la velocidad de reacción está en función de la temperatura y que elamortiguador empleado contenía EDTA; podemos ver un comportamiento extraño pues teóricamente sabemos que la velocidad de reacción de una enzima aumenta conforme aumenta la temperatura y comienza a disminuir cuando la enzima empieza a desnaturalizarse a causa del calor. Pero en la gráfica se observa la velocidad de reacción disminuye cuando a partir de 4ºC la temperatura aumenta y al los 25ºC la velocidadde reacción comienza a incrementar, lo cual se posiblemente se puede deber a que la presencia del EDTA en el amortiguador reaccionara de tal modo que inhibiera la acción catalítica de la enzima y a su vez ocasionará la disminución de la velocidad de reacción; éste supuesto inhibidor pudo ocupar temporalmente el centro activo por semejanza estructural con el sustrato original pero después con elaumento de la temperatura éste dejó de ocuparlo permitiendo a la enzima unirse con el sustrato lo que se refleja con el aumento de la velocidad de reacción de 25ºC a 50ºC.

Tubo | Absorbancia | [Pirúvico]µ M | Voµ M/min |
4ºC | 0.300 | 422.718282 | 14.0906094 |
25ºC | 0.386 | 544.221532 | 18.14071772 |
50ºC | 0.412 | 580.955072 | 19.36516907 |
Tabla 7. Resultados obtenidos en efecto detemperatura, sin emplear EDTA en el amortiguador.

Figura .Efecto de la temperatura, sin emplear EDTA en el amortiguador.
En la gráfica donde se muestra como la velocidad de reacción está en función de la temperatura y que a su vez se uso un amortiguador el cuál no contenía EDTA, podemos decir que al no contener EDTA el amortiguador cumplió su función pues a pesar de haber agregado NaOH y2.4-dinitrofenilhidrazina el sistema resistió los cambios de el pH para así poder evaluar únicamente el efecto de la temperatura.
Gracias a la gráfica podemos ver que la velocidad de reacción es muy sensible a la temperatura. Pues a temperaturas bajas, como a 4ºC la actividad enzimática se lleva a cabo muy lentamente pero cuando ésta se incrementa se observa que la velocidad de reacción acrecientadebido que al aumentar la temperatura aumenta la energía cinética de la moléculas es decir que el movimiento de cada molécula aumenta, chocando entre ellas generando mayor velocidad de reacción. Lo cual se ve reflejado desde la temperatura de 4ºC a 50ºC.
Las temperaturas analizadas no nos permiten determinar la temperatura óptima de la enzima, en otras palabras cuando su actividad catalítica esmáxima, pues en la gráfica no se ve un punto donde antes de él la velocidad de reacción va aumentando y después de él la velocidad de reacción vaya descendiendo; lo que nos indica que la enzima analizada es muy resistente a los cambios de temperatura pues aún a 50ºC su velocidad de reacción es mayor que a 25ºC; analizar una temperatura mayor a 50ºC hubiera sido importante para así ver que tan...