efectos de ozonoterapia

“EFECTOS HEPATOPROTECTORES DE LA OZONOTERAPIA

DR. FILIBERTO HERNANDEZ SANCHEZ

2015

Objetivos:
Demostrar los efectos citoprotectores de la Ozonoterapia
en el Daño Hepático.
1-Modelo Experimental de I/R Hepática (Modelo inflamatorio).
2-Hepatitis por Virus C.
3-Hepatitis por Virus A.
4-Cirrosis Hepática.

ATP

DESENERGIZACION
DESENERGIZACION
MITOCONDRIAL
MITOCONDRIAL

Ca++

AMP

Almacen deCa++

ADENOSINA
INOSINA

ALTERACIONES HOMEOSTASIS
IONICA Y VOLUMEN CELULAR

Na

+

Na

K

Ca++

H+

Na+

+

+

p50

Oxidación de -SH
Proteasas- Ca2+

HIPOXANTINA

XO

L-Citrulina + ON.

ác úrico + 2 O2.-

(+)
cinasa

p65

p65

Núcleo

ERO

FNT-
FNT-

DESACOPLE Y TRANSICION
PERMEABILIDAD MITOCONDRIAL

Cit C

CE

Fapa-1

Endotelina
ICAM-1
E-Selectina

ON .

CK

FNT-
FNT- , IL-1
iNOS
ICAM-1,
VCAM-1p50 p65
p50

Peroxidación
Peroxidación Lipídica

O2

IB (IKK)
I B

L-Arg

XDH

PQM-1

ERO
ERO

(+)

MUERTE
MUERTE
CELULAR
CELULAR

ON.

GRANULOCITO

Caspasa 9
(iniciadora)
Caspasa3
ejecutora

Fragmentación
ADN

Hepatocito

Monocito
FNT-

FNTreceptor

ERO
I/R
FNT-
FNT-

Reperfusión

ATP
ATP

FNT-

FNT-

Isquemia

ADP

Apoptosis
PMN
ERO
ICAM-1

Hepatocito
FNT-
FNT-

OBJETIVO GENERAL“Estudiar las acciones y los mecanismos asociados a la protección del PreOxi por
ozono contra el daño por I/R hepática”.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
 Demostrar la eficacia del PreOxi por ozono en el daño por I/R hepática, en nuestras
condiciones experimentales.
 Investigar, a través de la manipulación farmacológica, la participación de la
Adenosina, el ON. y la síntesis proteica, en los efectos protectoresdel PreOxi contra el
daño por I/R hepática.
 Demostrar que el PreOxi mantiene el balance redox celular a través del estudio de
sistemas generadores y secuestradores de ERO, la microscopia (óptica y electrónica)
y la inmunohistoquímica.

Diseño No.1. Eficacia del precondicionamiento oxidativo (PreOxi) contra el daño por
I/R hepática (n= 50)
Control Negativo
Control Negativo + PreOxi
PreOxi

O2 +I/R

Laparotomía

Anestesia

Laparotomía

Isquemia 90 min

Reperfusión 90 min

Isquemia 90 min

Reperfusión 90 min

Isquemia 90 min

Reperfusión 90 min

O3/O2, 15 ttos,
1,1 mg/kg, rectal

I/R

PreOxi + I/R

Anestesia

O3/O2, 15 ttos,
1,1 mg/kg, rectal

O2 , 15 ttos;
26 mg/kg, vía
rectal

Estudio de Marcadores de Protección contra EROS
Medidos a nivel de Hígado

A

C

B

D

Figura 8. Corteshistológicos de tejido hepático. A. Control Negativo, se observó una arquitectura normal del
lobulillo hepático. B. PreOxi + I/R, se observó aparente normalidad morfológica del lobulillo hepático. C.
Control positivo (I/R), se observó éxtasis sinusoidal moderada, activación de las células de Kupffer y presencia
de polimorfonucleares (neutrófilos) en forma diseminada y algunas células en apoptosis. D.O2 + I/R, se observó
una hemorragia sinusoidal con necrosis. HE 250X.

Control negativo

PreOZO+I/R

500 nm

I/R

500 nm

500 nm

Figura 17. Análisis Ultrastructural del tejido hepático mediante la Microscopía
Electrónica de Transmisión (MET): Control Negativo. Apariencia normal de la
mitocondrias, el retículo rugoso endoplasmático y peroxisoma, No se observó
ninguna alteración en le estructuradel núcleo. I/R. Grandes gotas de lípidos y
moderada alteración de las membranas y crestas mitocondriales. PreOxi + I/R. Los
cambios observados en el grupo sujeto a I/R fueron atenuados con el tratamiento
con ozono. La magnificación de las microfotografías responde al tamaño de la
barra (Barra = 500 nm).

Control Negativo

I/R

PreOxi + I/R

p65

p65

p65

A

D

G

FNT-

B

HSP-70

C

FNT-

EFNT-

H

HSP-70

F

HSP-70

I

Inmunohistoquímica de cortes de tejido hepático en función del tratamiento. Control negativo: animales sometidos
a anestesia + laparotomía; I/R: 90 min de isquemia seguida de 90 min de reperfusión; PreOZO + I/R, animales
precondicionados con ozono y sometidos a I/R. Se apreció una fuerte expresión de la subunidad p65, el FNT- y la HSP-70
en el grupo I/R (color...