eficiencia cel. competentes
Páginas: 3 (579 palabras)
Publicado: 27 de enero de 2014
¿Cuál es la eficiencia de transformación?
La competencia de un microorganismo depende de su capacidad para la absorción de ADN recombinante y sobrevivir a la introducción de ADN extraño en lacélula. Los diferentes organismos varían en estas capacidades, sin embargo los principios básicos de la introducción son el mismo. Modificaciones de la membrana de la célula / de la pared de losmicroorganismos deben ocurrir a menudo, utilizando ya sea una modificación química o una descarga eléctrica.
Cómo calcular la eficiencia de transformación
Después de los daños anteriormente, las células serecuperan y se calculan por su "absorción" eficiencia-medido como unidades formadoras de colonias por microgramo de ADN (ufc / g).
Para maximizar la eficiencia de la aparición o solucionar resultadosde baja eficiencia, utilice los teléfonos sugerencias para solucionar problemas de transformación continuación competentes y sugerencias.
Los factores que afectan la eficiencia de transformación:1. Las impurezas en el ADN - Para las células químicamente competentes, eliminar el fenol, proteínas, detergentes, y el etanol de la solución de ADN. Para las células electrocompetentes, etanolprecipitar ligaciones para limpiar ADN plásmido, ya que la sal y tampones inhiben severamente electroporación y aumentan el riesgo de formación de arcos. Además, disolver el ADN en agua estéril o 0,5 XTE (5 mM de Tris-HCl, 0,5 mM de EDTA).
2. El exceso de ADN o volumen - Añadir 1 a 10 ng de DNA en no más de un volumen de 5 l por 100 l de células químicamente competentes. Para las células ™Eficiencia Subcloning, utilizar 1 a 3 l por 50 l de células competentes. Para las células Electromax ™, añadir 1 l (1 a 50 ng) a 20 a 25 l de células.
3. La inhibición de la transformación por ligadura -Para One Shot ®, MAX Efficiency ®, Biblioteca Eficiencia ® y Subclonación células Eficiencia ™, diluir la reacción de ligación mezcla 5 veces con 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) y EDTA 1 mM antes de añadir...
La competencia de un microorganismo depende de su capacidad para la absorción de ADN recombinante y sobrevivir a la introducción de ADN extraño en lacélula. Los diferentes organismos varían en estas capacidades, sin embargo los principios básicos de la introducción son el mismo. Modificaciones de la membrana de la célula / de la pared de losmicroorganismos deben ocurrir a menudo, utilizando ya sea una modificación química o una descarga eléctrica.
Cómo calcular la eficiencia de transformación
Después de los daños anteriormente, las células serecuperan y se calculan por su "absorción" eficiencia-medido como unidades formadoras de colonias por microgramo de ADN (ufc / g).
Para maximizar la eficiencia de la aparición o solucionar resultadosde baja eficiencia, utilice los teléfonos sugerencias para solucionar problemas de transformación continuación competentes y sugerencias.
Los factores que afectan la eficiencia de transformación:1. Las impurezas en el ADN - Para las células químicamente competentes, eliminar el fenol, proteínas, detergentes, y el etanol de la solución de ADN. Para las células electrocompetentes, etanolprecipitar ligaciones para limpiar ADN plásmido, ya que la sal y tampones inhiben severamente electroporación y aumentan el riesgo de formación de arcos. Además, disolver el ADN en agua estéril o 0,5 XTE (5 mM de Tris-HCl, 0,5 mM de EDTA).
2. El exceso de ADN o volumen - Añadir 1 a 10 ng de DNA en no más de un volumen de 5 l por 100 l de células químicamente competentes. Para las células ™Eficiencia Subcloning, utilizar 1 a 3 l por 50 l de células competentes. Para las células Electromax ™, añadir 1 l (1 a 50 ng) a 20 a 25 l de células.
3. La inhibición de la transformación por ligadura -Para One Shot ®, MAX Efficiency ®, Biblioteca Eficiencia ® y Subclonación células Eficiencia ™, diluir la reacción de ligación mezcla 5 veces con 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5) y EDTA 1 mM antes de añadir...
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