EJERCICIOS enzimologia

EJERCICIOS DE INGENIERÍA DE ENZIMAS
1. -galactosidasa cataliza la hidrólisis de lactosa en Glc y Gal y es ampliamente usada en la industria lechera.
Una preparación comercial líquida de-galactosidasa de Kluyveromyces marxianus var lactis está siendo usada
en la producción de leche baja en lactosa. Se conoce que se requiere 500 IU de -galactosidasa por litro de
leche para reducir el contenido delactosa en 80% durante el almacenamiento (considerado satisfactorio). Ud
debe calcular la dosis de enzima requerida (mL de la preparación enzimática a ser añadida por litro de leche).
Se determinó laactividad de la enzima mediante un ensayo basado en determinar Glc por HPLC con un detector
de índice de refracción. El procedimiento analítico consistió en añadir 0.3 mL de la preparaciónenzimática,
diluida 3 veces a 1.2 mL de solución de lactosa de 150 g L-1 e incubar la mezcla a 35 °C y pH 6.4. Se tomaron
muestras a diferentes tiempos de reacción y se inactivó la enzima con ebullición previala filtración y el análisis
por HPLC. Se obtuvieron de esta manera los siguientes resultados:

Donde t es el tiempo de reacción y g la concentración de glucosa.
2. Se ha obtenido un extracto crudo deglucosa isomerasa (EC 5.3.1.5) después de cultivar Streptomyces
flavogriseus y ruptura de las células en un homogeneizador. La enzima cataliza la isomerización reversible de
Glc en Fru. Un mL demuestra de este extracto, diluido como se indica en la siguiente tabla, fue puesto en
contacto con 4 mL de solución de Glc 0.1 M. La concentración de Glc fue monitorizada durante la reacción y se
obtuvieronlos siguientes datos:

Calcule la actividad de la glucosa isomerasa en el extracto crudo, expréselo en IU mL-1, y discuta los resultados.
3. La actividad de una esterasa recombinante de Pseudomonasfluorescens (etil acetato + H2O ácido acético +
etanol) se determina midiendo etanol usando cromatografía de gases. Una muestra de 1 L de la esterasa
purificada es incubada con 10 mL de solución...