el chera

UNIVERSIDAD DEL ZULIA
FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA DE BIOANALISIS
CÁTEDRA INMUNOLOGÍA

MATERIAL DE APOYO Y PREGUNTAS DEL TALLER MÉTODOS
INMUNOLÓGICOS QUE UTILIZAN ANTÍGENOS O ANTICUERPOS
MARCADOS

OCTUBRE DE 2009

INTERACCIÓN PRIMARIA ANTÍGENO-ANTICUERPO
Si bien la interacción primaria Ag-Ac no es visible, existen distintos métodos que hacen
posible visualizarla. La estrategiaconsiste en "marcar" al Ac o al Ag mediante la unión
covalente (conjugación) de determinadas moléculas, tales como FLUOROCROMOS,
ISOTOPOS RADIOACTIVOS o ENZIMAS, para poder hacer visible esa primera
interacción, dependiendo del marcador que se utilice, la técnica inmunológica recibe un
determinado nombre y utiliza un sistema de detección diferente. Las técnicas que
veremos a continuación no sontan sencillas y económicas como las que vimos
anteriormente, sin embargo son mucho más sensibles, es decir, son capaces de detectar
menores concentraciones de Ag o Ac.

INMUNOFLUORESCENCIA: La inmunofluorescencia (IF) es una técnica que emplea
anticuerpos conjugados a fluorocromos. Los fluorocromos son moléculas que al ser
excitadas con la energía de una determinada longitud de onda soncapaces de emitir
energía de una longitud de onda mayor.
Las técnicas de inmunofluorescencia utilizando Ac conjugados permiten detectar la
presencia de Ags en tejidos (inmunohistoquímica) o células (inmunocitoquímica). La
inmunofluorescencia de tejidos se realiza sobre cortes de tejido fijado montado sobre un
portaobjetos. A través de estas técnicas es posible detectar tanto Ags celulares (demembrana, citoplasmáticos o nucleares) como extracelulares (matriz extracelular,
membrana basal, etc.) La inmunofluorescencia de células puede efectuarse sobre células
vivas o fijadas, las cuales pueden hallarse en suspensión o adheridas a un soporte sólido
(portaobjetos). Esta técnica permite detectar Ags localizados en la membrana plasmática,
citoplasma o núcleo de la célula. Lainmunofluorescencia DIRECTA es la forma más
simple de localizar un Ag y consiste en utilizar un Ac "marcado" específico para dicho Ag
(Ac primario). Para realizar esta técnica, se incuba la muestra con el Ac primario
"marcado" durante un determinado tiempo, a la temperatura indicada, luego del cual se
retira el exceso de Ac mediante un lavado y se procede a la detección de la fluorescencia.

Lainmunofluorescencia INDIRECTA utiliza un Ac primario sin marcar que reconoce al Ag
de interés y luego, para evidenciar la presencia del Ag, emplea un segundo Ac marcado
(Ac secundario) capaz de reconocer el Ac primario. Por ejemplo, si el Ac primario es una
IgG de ratón, el Ac secundario podrá ser anti-IgG de ratón hecho en conejo.

Para realizar esta técnica, se incuba la muestra con el Acprimario, tal como vimos
anteriormente, se realiza un lavado para retirar el exceso de Ac y luego se incuba con el
segundo Ac marcado. Posteriormente se realiza un lavado y se procede a la detección de
la marca.
VENTAJAS DESVENTAJAS
Directa
Rápida y sencilla.
Se necesita un Ac primario marcado para cada Ag a detectar (los Ac marcados son más
caros que los Ac no marcados. Menos sensible.Indirecta
Más sensible. Un mismo Ac secundario puede reconocer distintos Ac primarios
(generados en la misma especie)
Lleva más tiempo.

Los fluorocromos son moléculas que emiten luz de una determinada longitud de onda
luego de ser excitados por un haz de luz de longitud de onda menor. Cada fluorocromo es
capaz de emitir luz dentro de un determinado espectro de longitud de onda. Por ejemplo,el fluorocromo denominado Isotiocianato de Fluoresceina (FITC) emite en la gama del
verde, mientras que la Ficoeritrina emite en la gama del rojo. El hecho de que existan
distintos fluorocromos capaces de emitir a diferentes longitudes de onda, permite que
puedan detectarse Ag diferentes en un mismo corte de tejido o célula. La visualización de
la fluorescencia puede realizarse utilizando un...