El Metodo De Bradford
Páginas: 3 (736 palabras)
Publicado: 27 de julio de 2011
EL MÉTODO DE BRADFORT
Está basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 (figura 3) en respuesta a diferentes concentraciones de proteínas. Este compuesto interaccionacon aminoácidos básicos (especialmente arginina) y aromáticos. Esta unión del colorante con las proteínas provoca un cambio en el máximo de absorción del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, estemétodo se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuando el colorante se une ala proteína. Experimentalmente se mide la diferencia de absorbancias entre 595 y 465 nm (595-465nm).
Figura 3. Estructura química del colorante Coomassie brilliant blue G-250.
Algunas ventajasimportantes del método son:
* La intensidad de absorción depende del contenido de aminoácidos básicos y aromáticos.
* El complejo colorante-proteína tiene un alto coeficiente de extinción locual es imprescindible para aumentar la sensibilidad en la medición de proteínas.
* La unión colorante-proteína es un proceso muy rápido (2min) y el complejo permanece estable durante un tiemporelativamente largo, una hora. Haciendo de este un proceso muy rápido, y que no requiere un tiempo crítico para el ensayo.
PROCEDIMIENTO
Preparar los siguientes patrones para la curva:
Tubo |B | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
Sln patrón(mL) | 0 | 2 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Solvente (mL) | 2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Concentración(mg/mL) | 0 | 1000 | 500 | 250 | 125 |62,5 | 31,2 | 15,6 | 7,18 |
Tomar 100 µL de solución de cada Concentración
Añadir a cada tubo 3 mL del reactivo azul de Coomassié
Agitar y dejar reposar 10 minutos
Leer (%) deTransmitancia a 595nm.
La muestra problema se tratan de igual forma que los patrones para ser cuantificadas con la curva de calibración, realizando adicionalmente dos diluciones de la misma.
RESULTADOS Y...
Está basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 (figura 3) en respuesta a diferentes concentraciones de proteínas. Este compuesto interaccionacon aminoácidos básicos (especialmente arginina) y aromáticos. Esta unión del colorante con las proteínas provoca un cambio en el máximo de absorción del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, estemétodo se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuando el colorante se une ala proteína. Experimentalmente se mide la diferencia de absorbancias entre 595 y 465 nm (595-465nm).
Figura 3. Estructura química del colorante Coomassie brilliant blue G-250.
Algunas ventajasimportantes del método son:
* La intensidad de absorción depende del contenido de aminoácidos básicos y aromáticos.
* El complejo colorante-proteína tiene un alto coeficiente de extinción locual es imprescindible para aumentar la sensibilidad en la medición de proteínas.
* La unión colorante-proteína es un proceso muy rápido (2min) y el complejo permanece estable durante un tiemporelativamente largo, una hora. Haciendo de este un proceso muy rápido, y que no requiere un tiempo crítico para el ensayo.
PROCEDIMIENTO
Preparar los siguientes patrones para la curva:
Tubo |B | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
Sln patrón(mL) | 0 | 2 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Solvente (mL) | 2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 | 1 |
Concentración(mg/mL) | 0 | 1000 | 500 | 250 | 125 |62,5 | 31,2 | 15,6 | 7,18 |
Tomar 100 µL de solución de cada Concentración
Añadir a cada tubo 3 mL del reactivo azul de Coomassié
Agitar y dejar reposar 10 minutos
Leer (%) deTransmitancia a 595nm.
La muestra problema se tratan de igual forma que los patrones para ser cuantificadas con la curva de calibración, realizando adicionalmente dos diluciones de la misma.
RESULTADOS Y...
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