El oscurantismo
El fraccionamiento subcelular es un conjunto de métodos y técnicas que tienen como objetivo obtener fracciones puras o enriquecidas en un determinado componente celular, ya sea éste un orgánulo (mitocondrias, núcleos, peroxisomas, etc.) una fracción de membrana (membrana total, plasmática, dominio basolateral, dominio apical, etc.), complejos multiproteicos(citoesqueleto de actina, microtúbulos, poros nucleares, etc.).
Fases:
* Preanalítica: Obtención preparación preliminar de la muestra hasta llegar al laboratorio
* Analítica: o de aplicación de procedimientos. Toma y tratamiento de datos, recogida de resultados en un informe
* Postanalítica: Validación técnica del informe analítico.
Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dosetapas :
* Rotura de las células o tejidos para obtener un lisado celular (o tisular) en el que la fracción deseada se encuentre en condiciones adecuadas para su purificación.
* Separación de la fracción deseada del resto de componentes de la célula o del tejido mediante algún criterio como puede ser una diferencia de densidad (centrifugación en gradientes o centrifugación diferencial), lapresencia de algún antígeno (cromatografía de inmunoafinidad, inmunoprecipitación, etc.).
CENTRIFUGACION:
La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad mediante una fuerza rotativa, de una máquina llamada centrífuga, la cual imprime a la mezcla con una fuerza mayor que la de la gravedad, provocando la sedimentación de los sólidos o de laspartículas de mayor densidad.
La cromatografía es un método físico o de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichoscomponentes.
Las técnicas cromatográficas1 son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, loscomponentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separándose, pasan por un detector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:
* Separar los componentes de la mezcla,para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
* Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.
ELECTROFORESIS:
La electroforesis es un método de laboratorio en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separarbiomoleculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.
es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico.1 La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en papel o en acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien en disolución(electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa. la electroforesis se usa en una gran mayoría en la materia del adn recombinan-te ya que nos permite saber la carga que poseen los polipeptidos, y separar los diferentes polipeptidos resultantes de las variaciones del experimento del adn...
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