El Perfume

BodAS de PlAtA de lA ReACCIóN eN CAdeNA de lA PolIMeRASA (PCR) - PÁGS: 65 - 75 / 104

Artículo de revisión

Bodas de plata de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
Gladys Pinilla B1, Karen Cubillos2, Mónica Rodríguez1,3
1. Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca, Bogotá - Colombia. 2. Instituto de Biotecnología Universidad Nacional, Bogotá - Colombia. 3. Universidad NacionalPosgrado de Microbiología Correspondencia: gpinillab@gmail.com Recibido 27-04-08 / Aceptado 19-05-08

Resumen
Invenciones verdaderamente revolucionarias han promovido el cambio de pensamiento y la manera de trabajar en el ámbito del laboratorio. Una de estas invenciones es la reacción en cadena de la polimerasa, la cual ha aportado de manera significativa al conocimiento científico. Las diferentesmetodologías que aplican la reacción en cadena de la polimerasa han permitido a los investigadores manipular la información genética de los organismos, facilitando procedimientos como la clonación y la secuenciación, entre otros, lo cual agilizó significativamente los resultados del Proyecto Genoma Humano. Existe diversidad de variantes de la reacción en cadena de la polimerasa convencional. Esteescrito tiene por objetivo presentar una revisión sobre el tema, especialmente sobre la reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, debido a las ventajas que ofrece. Palabras clave: agentes intercalantes, cuantificación absoluta, cuantificación relativa, curvas de calibración, gen normalizador, sondas fluorogénicas.

Abstract Silver anniversary of the Polymerase Chain Reaction (PCR)
Trulyrevolutionary inventions have promoted the change of thought and the way to work in the laboratory. One of these inventions is the polymerase chain reaction (PCR), which has contributed significantly to the scientific knowledge. The different methodologies that use the polymerase chain reaction have allowed investigators to manipulate the genetic information of organisms, facilitating procedureslike cloning and sequencing, among others, which sped the Human Genome Project results significantly. There are several variants of the conventional polymerase chain reaction. This work tries to present a revision on the subject, especially on the Real-time polymerase chain reaction, due to the advantages that it offers. Key words: absolute quantification, calibration charts, fluorescent probe,normalizing gene, intercalate agents, relative quantification,

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NoVA - PUBlICACIóN CIeNtífICA eN CIeNCIAS BIoMÉdICAS - ISSN:1794-2470 Vol.6 No. 9 eNeRo - JUNIo de 2008:101-212

Introducción
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) fue creada por Kary B. Mullis en 1983. En sus 25 años de evolución ha contribuido de manera significativa en los procesos investigativos básicos y dediagnóstico en gran cantidad de patologías. Esta estrategia metodológica le permitió a Mullis en 1993 ganar el premio Nobel de química, considerado como una revolución para el desarrollo de la biología molecular (1). En 1989, Science seleccionó la PCR como el principal desarrollo científico y la Taq polimerasa como la molécula del año. El principio de la PCR consiste en determinar la secuencia deinterés y seleccionar pequeños segmentos de nucleótidos llamados iniciadores o cebadores, complementarios con la secuencia de nucleótidos de los extremos opuestos de las cadenas que flanquean a dicha secuencia, a partir de los cuales mediante la acción de la Taq polimerasa, se inicia la elongación o síntesis de nuevas cadenas en el extremo 3’ de cada iniciador, para obtener múltiples copias de dichosegmento (2,3). Las aplicaciones de la PCR son múltiples, entre ellas la amplificación de fragmentos de genes, modificación de fragmentos de ADN, detección sensible de microorganismos y su genotipificación, análisis de muestras arqueológicas y estudios antropológicos, la detección de mutaciones importantes en enfermedades hereditarias, transformación maligna o tipaje de tejidos, el análisis de...