El pH y su efecto en el crecimiento de los microorganismos (Lactobacilos)

Practica 2
El pH y su efecto en el crecimiento de los microorganismos (Lactobacilos)

Objetivo
Que el alumno observe el efecto que tiene el pH en el crecimiento de microorganismos

Introducción
Es un parámetro crítico en el cultivo de microorganismos ya que estos sólo pueden crecer en un rango estrecho de pH fuera del cual mueren rápidamente. El pH intracelular es ligeramente superior aldel medio que rodea las células ya que, en muchos casos, la obtención de energía metabólica depende de la existencia de una diferencia en la concentración de protones a ambos lados de la membrana citoplásmica.
Cada tipo de microorganismo tiene un rango de pH en el que puede vivir adecuadamente, fuera de este rango muere.
Los rangos de pH tolerables por diferentes tipos de microorganismos son,también, distintos. Hay microorganismos acidófilos que pueden vivir a pH=1.0 y otros alcalóficlos que toleran pH=10.0
El pH interno en la mayoría de los microorganismos está en el rango de 6.0 a 7.0.
Hay que considerar que, como consecuencia del metabolismo, el pH del medio de cultivo suele tender a bajar durante el cultivo. La bajada del pH se puede deber a varios factores, uno de los cuales esla liberación de ácidos orgánicos de cadena corta (fórmico, acético, láctico) por ciertas bacterias.
Buffer es una o varias sustancias químicas que afectan la concentración de los iones de hidrógeno en el agua. Un buffer amortiguador lo que hace es regular el pH. Cuando un buffer es adicionado al agua, el primer cambio que se produce es que el pH del agua se vuelve constante. De esta manera,ácidos o bases adicionales no podrán tener efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se estabilizará de inmediato. La función de una solución amortiguadora es la de resistir los cambios de pH cuando se le agregan ligeras cantidades de ácido o base. Su función es muy importante en los sistemas químicos y biológicos y los procesos que requieran un cierto valor de pH que no sea modificable confacilidad. Ya sea para el funcionamiento adecuado de las enzimas en el sistema digestivo o los glóbulos blancos en el torrente sanguíneo.

Materiales y reactivos
Materiales día 1
Probeta de 100 ml
2 matraces Erlenmeyer de 250 ml
2 gasas de 30 x 30 cm aprox.
Algodón
Papel aluminio
Pizeta
Marcador permanente y cinta masking tape
2 agitadores magnéticos
Plato de agitación
4 tirasindicadoras de pH
Buffer de fosfatos 10mM, fosfato de sofio monohidratado 0.05% y fosfato disodico heptahidratado 0.1694%.
Autoclave
Matraz aforado de 100 ml
Para cada matraz se necesitan 1g/l glucosa. 0.5g de peptona y 0.3g de extracto de carne.
NOTA: SE CAMBIARON LOS MATRACES ERLENMEYER POR TUBOS PARA CULTIVO DE 25X200 DEBIDO A LA FALTA DE MATERIAL EN EL ALMACEN DE LA FACULTAD ASI COMO SE MODICARONLAS CANTIDADES DE REACTIVO PARA CADA TUBO (0.1g GLUCOSA, 0.05g PEPTONA Y 0.03g EXTRACTO DE CARNE) Y LAS CANTIDADES DE AGUA Y BUFFER DE FOSFATOS DE 25 ml A CADA TUBO
Materiales y reactivos día 2
Jeringa esteril de 10 ml
1 yakult
Mechero bunsen
Encendedor
Marcador permanente y masking tape
1 microscopio, 2 porta objetos y 2 cubre objetos
0.5 ml de aceite de inmersión
NOTA: EN ESTE PASO DELDÍA DOS LOS MICROSCOPIOS SUCIOS NOS IMPIDIERON LA BUSQUEDA DE LOS LACTOBACILOS PARA VER SU MORFOLOGIA
Materiales y reactivos día 3
4 tiras indicadoras de pH
Papel seda para limpiar lentes
1 celda para espectrofotómetro
Pizeta
Espectrofotómetro

Metodología
Día 1
Matraz 1 (3 tubos de cultivo de 25x200) Preparación del buffer
Medir 100 ml de agua con la probeta y verterlos al matraz quecontiene un agitador magnético.
Buffer de fosfatos 10 nM; fosfato monohidratado 0.05 g y fosfato di sódico heptahidratado 0.1694. pesar las cantidades de los reactivos y aforar a 100 m l
Medir el pH inicial (6.68)
Verter a un matraz Erlenmeyer y agregar los componentes g/l para preparar 100 ml del medio de cultivo, se agitara hasta disolver todos los componentes
Se agregaran 25 ml del buffer...