Electroforesis capilar
Páginas: 23 (5708 palabras)
Publicado: 25 de enero de 2012
INTRODUCCIÓN
En el presente se describirá un método relativamente nuevo, la electroforesis capilar en el cual se utiliza un capilar en cuyo interior hay un tampón y con un diámetro interno de 10 a 100µm y una longitud de 40 a 100cm. El capilar une dos recipientes que contienen el tampón y además dos electrodos de platino. La muestra se introduce en uno de los extremos del capilar mientras seaplica entre los dos electrodos un potencial de corriente continua del orden de 20 a 30 kv durante la separación. Los analitos, una vez separados, llegan al detector, que está situado en el extremo opuesto a aquél por donde se ha introducido la muestra.
En la electroforesis capilar las separaciones que en esta se realizan dependen de las diferentes velocidades de los analitos, iones que migranbajo la influencia de un campo eléctrico externo. Por tanto, esta técnica es sólo aplicable a analitos que sonde naturaleza iónica en el seno de una disolución amortiguadora contenida en el capilar.
También se consideraran en primer lugar los principios de las separaciones electroforéticas, dedicando especial atención a la electroforesis capilar, y las aplicaciones de esta técnica a unadiversidad de problemas analíticos.
1. DEFINICIÓN DE ELECTROFORESIS
Ha sido definida como el movimiento o desplazamiento diferencial de especies cargadas (iones), sustancias neutras o migración pasiva, por atracción o repulsión en un campo eléctrico.
La electroforesis en solución en medios libres sin elementos soportes (agar, almidón, geles de poliacrilamida), fue desarrollada por Tiselius (2) (3),el que resolvió mezclas de proteínas en un tubo aplicando un campo eléctrico de corriente continua, no pulsante, estudios que lo hicieron acreedor al Premio Nóbel en Química.
Los problemas experimentales que se presentaron, estuvieron vinculados a la difusión térmica y a la convección, lo que determinó el empleo de medios anticonvectantes como agar, agarosa y poliacrilamida en forma de geles.Las técnicas que más se han desarrollado están en la actualidad aplicadas al campo de las proteínas y productos de la biología molecular, como ser los geles de agarosa y poliacrilamida en placas o films de distinto espesor verticales u horizontales (4) (fig. 3).
2. FUNDAMENTOS DE LAS SEPARACIONES ELECTROFORETICAS.
La velocidad de migración de un ion es el seno de un campo eléctrico, es igualal producto de la intensidad del campo eléctrico E (Vcm-1) por la movilidad electroforetica µe (cm2V-1s-1) esto es:
v= µeE (A-1)
La movilidad electroforetica es directamente proporcional a la carga eléctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento. El campoeléctrico actúa solamente sobre los iones. Si dos especies difieren bien en la carga o en las fuerzas de rozamiento, se moverán a través del tampón y se separan.
Para los iones del mismo tamaño la fuerza impulsora será mayor, en el de mayor carga, y tendrá una velocidad de migración más rápida. Para los iones que presenten la misma carga la fuerza de retardo por rozamiento será más pequeña, en elion más pequeño, y tendrá una velocidad de migración más rápida. La relación carga-tamaño de los iones combina estos dos efectos.
3. ELECTROFORESIS CAPILAR
La electroforesis capilar es un método de separación que se basa en diferente velocidad de migración de las especies cargadas, en el seno de una solución amortiguadora a través de la cual se aplica un campo eléctrico constante. Laelectroforesis se ha aplicado a un conjunto de problemas de separaciones analíticas dificultosas: aniones y cationes inorgánicos, aminoácidos, fármacos, vitaminas proteínas, ácidos nucleicos y otras numerosas especies.
Este tipo de electroforesis es una versión instrumental de la electroforesis, ha sido desarrollada en la última década, llegando a ser una importante técnica de separación utilizada por...
En el presente se describirá un método relativamente nuevo, la electroforesis capilar en el cual se utiliza un capilar en cuyo interior hay un tampón y con un diámetro interno de 10 a 100µm y una longitud de 40 a 100cm. El capilar une dos recipientes que contienen el tampón y además dos electrodos de platino. La muestra se introduce en uno de los extremos del capilar mientras seaplica entre los dos electrodos un potencial de corriente continua del orden de 20 a 30 kv durante la separación. Los analitos, una vez separados, llegan al detector, que está situado en el extremo opuesto a aquél por donde se ha introducido la muestra.
En la electroforesis capilar las separaciones que en esta se realizan dependen de las diferentes velocidades de los analitos, iones que migranbajo la influencia de un campo eléctrico externo. Por tanto, esta técnica es sólo aplicable a analitos que sonde naturaleza iónica en el seno de una disolución amortiguadora contenida en el capilar.
También se consideraran en primer lugar los principios de las separaciones electroforéticas, dedicando especial atención a la electroforesis capilar, y las aplicaciones de esta técnica a unadiversidad de problemas analíticos.
1. DEFINICIÓN DE ELECTROFORESIS
Ha sido definida como el movimiento o desplazamiento diferencial de especies cargadas (iones), sustancias neutras o migración pasiva, por atracción o repulsión en un campo eléctrico.
La electroforesis en solución en medios libres sin elementos soportes (agar, almidón, geles de poliacrilamida), fue desarrollada por Tiselius (2) (3),el que resolvió mezclas de proteínas en un tubo aplicando un campo eléctrico de corriente continua, no pulsante, estudios que lo hicieron acreedor al Premio Nóbel en Química.
Los problemas experimentales que se presentaron, estuvieron vinculados a la difusión térmica y a la convección, lo que determinó el empleo de medios anticonvectantes como agar, agarosa y poliacrilamida en forma de geles.Las técnicas que más se han desarrollado están en la actualidad aplicadas al campo de las proteínas y productos de la biología molecular, como ser los geles de agarosa y poliacrilamida en placas o films de distinto espesor verticales u horizontales (4) (fig. 3).
2. FUNDAMENTOS DE LAS SEPARACIONES ELECTROFORETICAS.
La velocidad de migración de un ion es el seno de un campo eléctrico, es igualal producto de la intensidad del campo eléctrico E (Vcm-1) por la movilidad electroforetica µe (cm2V-1s-1) esto es:
v= µeE (A-1)
La movilidad electroforetica es directamente proporcional a la carga eléctrica del analito e inversamente proporcional a los factores de retardo por rozamiento. El campoeléctrico actúa solamente sobre los iones. Si dos especies difieren bien en la carga o en las fuerzas de rozamiento, se moverán a través del tampón y se separan.
Para los iones del mismo tamaño la fuerza impulsora será mayor, en el de mayor carga, y tendrá una velocidad de migración más rápida. Para los iones que presenten la misma carga la fuerza de retardo por rozamiento será más pequeña, en elion más pequeño, y tendrá una velocidad de migración más rápida. La relación carga-tamaño de los iones combina estos dos efectos.
3. ELECTROFORESIS CAPILAR
La electroforesis capilar es un método de separación que se basa en diferente velocidad de migración de las especies cargadas, en el seno de una solución amortiguadora a través de la cual se aplica un campo eléctrico constante. Laelectroforesis se ha aplicado a un conjunto de problemas de separaciones analíticas dificultosas: aniones y cationes inorgánicos, aminoácidos, fármacos, vitaminas proteínas, ácidos nucleicos y otras numerosas especies.
Este tipo de electroforesis es una versión instrumental de la electroforesis, ha sido desarrollada en la última década, llegando a ser una importante técnica de separación utilizada por...
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