Electroforesis De Adn

ELECTROFORESIS DE ADN

ELECTROPHORESIS OF DNA

Kati Lara Lastre; Gretica Ledesma Jaraba; Katys Montes Causado; Deyber Bertel Paternina

Resumen
La experiencia realizada tuvo como objetivo visualizar mediante electroforesis en gel de agarosa extractos de ADN, el cual se caracteriza por ser uno de los métodos más utilizados para analizar y caracterizar ácidos nucleicos de distintasprocedencias,es una técnica de separación que consiste en el trasporte de iones a través de una disolución por acción de un campo eléctrico. Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de ADN de diferente tamaño van a emigrar de forma distinta en una electroforesis en gel de agarosa.

Palabras claves:Electroforesis,Búfer de carga, Fluorescencia, Cargas eléctricas, Ácidos nucleicos, Agarosa,Transiluminador de UV.

Abstract
The experience was focused visualized by agarose gel electrophoresis of DNA extracts, which is characterized as one of the methods used to analyze and characterize nucleic acids from different sources, is a separation technique which consists in transporting ions through a solution bythe action of an electric field. The gels behave as a molecular sieve for separating charged molecules and depending on its size and shape. Thus, DNA molecules of different sizes will migrate differently in an agarose gel electrophoresis.

Keywords: electrophoresis, loadingbuffer, fluorescence, electrical loads, nucleic acids, Agarose, UVtransilluminator.

Introducción
La electroforesis en geles un método que se emplea para separar macromoléculas (proteínas, isoenzimas, ácidos nucleicos) en función del tamaño, la carga eléctrica y otras propiedades físicas. Las propiedades de dichas moléculas determinan la velocidad con que un campo eléctrico puede desplazarla a través de un medio gelatinoso por lo que el movimiento también depende de dos fuerzas adicionales; inicialmente la friccióncon el solvente dificultará  este movimiento originando una fuerza que se opone, por otro lado  las moléculas tienen que moverse en forma aleatoria o movimiento browniano debido a que poseen energía  cinética propia denominada  difusión.
Los ácidos nucleícos separados en geles de agarosa pueden visualizarse mediante tinción con colorantes fluorescentes, lo cual permite evaluar su integridad yestimar su concentración mediante un análisis comparativo con patrones de concentración conocida. Los colorantes fluorescentes actúan mediante inserción entre las pares de bases que conforman el ácido nucleico. El bromuro de etidio es ampliamente utilizado para la visualización de ADN y ARN.
Algunos de los usos de la electroforesis de ácidos nucleicos en geles de agarosa son:determinar los tamaños moleculares de los ácidos nucleicos, analizar los fragmentos cortados con enzimas de restricción, comparar los tamaños entre sí de distintos tipos de ADN y aislamiento y recuperación de fragmentos de ADN purificados.

Materiales y métodos
La realización de esta experiencia se basó principalmente en los siguientes pasos.
1. Armar los moldes: Ensamble del molde deelectroforesis, colocando el peine que formó los posos donde se adicionaron las muestras.

2. Preparar el agar

%pv=gstoltsln*100
0.8%=gsto50ml*100ml
gsto=0.8* 50ml100%
= 0.4 g de agarosa solida
Para la preparación del gel de agarosa 1X se disolvieron 0.4 gr de agarosa pura en 50 ml de solución TBE. Disolviendo la agarosa con ayuda de un agitador magnético teniendo en cuenta los intervalosde la siguiente tabla:
Tiempo (min) | Velocidad (RPM) | Tº (ºC) |
1 | 90 | 70 |
2 | 170 | 70 |
3 | 260 | 80 |
4 | 300 | 90 |
5 | 300 | 100 |
6 | 450 | 150 |
7 | 400 | 160 |
8 | 340 | 160 |
9 | 130 | 160 |

Luego de diluir la solución, la temperatura se llevo a 60ºC.
Se le adicionó al gel 1.5 µL de sybr safe y se deposito el gel dentro de la cámara de electroforesis...