Electroforesis De Proteina SDS PAGE

“Electroforesis de proteínas (SDS-PAGE)”

Richard Osses Angulo
e-mail: r.ossesangulo@uandresbello.edu
Lucas Iparraguirre Vizcarra
e-mail: l.iparraguirrevizcarrauandresbello.edu



1 INTRODUCCIÓNLa electroforesis corresponde a un método de separación que se basa en una migración de especies cargadas a diferentes velocidades, a través de una solución amortiguadora a la cual se le aplica uncampo eléctrico constante.
Principalmente se ha utilizado para la solución de diferentes problemas tales como las separaciones analíticas complejas como son iones inorgánicos, aminoácidos,catecolaminas, fármacos, vitaminas, nucleótidos, entre otras especies.
Una separación electroforética se lleva a cabo al inyectar una muestra dentro de una solución tampón que está depositada en untubo estrecho o un soporte poroso y plano, como por ejemplo papel o un gel semisólido. A continuación se utiliza un elevado potencial de corriente al tampón mediante dos electrodos situados en losextremos del tampón. Este potencial impulsa a los iones de la muestra a migrar hacia uno de los lados del electrodo. La velocidad de migración de una especie dada depende de su carga y también del tamañode esta. Las separaciones, se basan en las diferencias en la relación carga-tamaño entre los diferentes analitos presentes, por lo que a medida que sea mayor esta relación, más rápido migra un ionespecífico a través del campo eléctrico.




Figura N°1: Técnica de electroforesis.

2 OBJETIVOS

Realizar una separación espectrofotométrica SDS-PAGE y determinar el peso molecular de laproteína incognita.

3 PARTE EXPERIMENTAL

3.1 MATERIALES Y REACTIVOS

Fuente de electroforesis
Cubeta de electroforesis con cristales, peines y separadores
Vaso precipitado
Formador de geles
Aguadesionizada
Amortiguador separador 1
SDS
Acrilamida/bisacrilamida
TEMED
Persulfato de amonio
Azul Coomassie R-250
Electrodos
Solución tampón
Micropipeta
Metanol;
Ácido acético
Tris 0,5 M pH 6,8
Tris 1...