Electroforesis Dna

Electroforesis DNA
DNA: carrega, un nucleotid una carrega negativa Totes les molecules la mateixa densitat de carrega Separació del DNA segons la seva mida , sempre suport restrictiu

Dos tipusde gel agarosa separació de fragments grans Acrilamida resolució d’una base (seqüenciació)

AGAROSA CARACTERÍSTIQUES - INERT / TRANSPARENT - RELATIVA RESISTÈNCIA A pH i a T - RESISTENT AGENTSDESNATURALITZANT:NaoH/formaldehid) - SI POT PRESENTAR EFECTE ELECTROENDOSMÒTIC - VARIETAT EN EL TAMANY DEL PORUS SEGONS LA CONCENTRA

Gel SUBMERGIT

Aplicació de la mostra: - tampó dens (glicerol) /marcador electroforètic (BB) - aplicació sempre en un extrem Tampó NEUTRE: a. NUCLEICS CARREGATS NEGATIVAMENT ( anode )

ELECTROFORESI/ÀCIDS NUCLEICS

GELS AGAROSA / NATIUS (NO DESNATURALITZANTS)DNA exemples: Mapes de restricció (determinar pm) Estudi DNA circular (topoisomers) Camp polsant (grans grandaries)

GELS AGAROSA / DESNATURALITZANT DNA AGENT DESNATURALITZANT NaOH exemples:PRESENCIA DE NICKS agent desnaturalitzant: FORMALDEHID exemples: DETERMINA EL pm O TAMANY DEL m-RNA NORTHERN

RNA

GELS POLIACRILAMIDA / NATIU (NO DESNATURALITZANT) ÍDEM PROTEÏNES (SUPORT/POLIMERITZACIÓ/ SISTEMA ELEC.) Exemples: ANÀLISI CURVATURA INTERACCIÓ DNA-PROTEINA ANÀLISI MUTACIONAL

GELS POLIACRILAMIDA / DESNATURALITZANT agent desnaturalitzant: UREA/ FORMAMIDA exemples: SEQÜÈNCIAPURIFICACIÓ DE OLIGOS

Exemple de gel agarosa natiu

Recuperació de DNA de gels d’eletroforesi.

•

1. Electroelució – es retalla el tros de gel que conté la banda. Es posa dins d’un sac dediàlisi i s’aplica corrent. El DNA és atret cap a l’ànode.

•

2. Agarosa amb un punt de fusió baix. – Per fer els gels s’utilitza una agarosa que té un punt de fusió baix (37ºC, més baix que el delDNA).Es talla la banda d’agarosa i es fon 3. Especial – Hi ha sistemes comercials que permeten l’adsorció del DNA del gel a un material de un tub que té una elevada afinitat pel DNA. (cromatografia...