Electroforesis En Gel De Agarosa


NOMBRES: Rodríguez Alejo, Martirén Joaquín Alfonso, Gómez Olmedo Joaquín.
Trabajo práctico 1: Acidos Nucleicos.

Electroforesis en geles deagarosa

INTRODUCCIÓN: Consiste en la separación de moléculas (ácidos nucleicos en este caso) a través de una matriz tamponada (agarosa). La matriz funciona como un filtro, separando moléculas en uncampo eléctrico, de acuerdo al tamaño y la carga neta que poseen. En el ADN, al tener carga negativa, migran de negativo a positivo.
Los ADN separados en agarosa pueden visualizarse mediante tinción concolorantes fluorescentes (bromuro de etidio, syber green, gel red).
Para la cuantificación de ADN se utiliza una secuencia de concentraciones de solución patrón de ADN con la que se comparan nuestrasmuestras de ADN de concentración desconocida.

OBJETIVO:
-Familiarizarse con métodos de separación de ácidos nucleicos mediante electroforesis en gel de agarosa.
-Determinación de los tamañosmoleculares mediante electroforesis en gel de agarosa, haciendo una recta patrón con fragmentos de adn de peso molecular conocido.

MATERIALES:
-Micropipetas automáticas y puntas desechables para lasmismas.
-Probetas.
-Matraces pequeños.
-Tubos eppendorf.
-Microondas.
-Equipos de electroforesis (cubeta, soporte, peine, fuente de alimentación)
-Transiluminador de luz UV.
-Erlenmeyer.MÉTODOS:

A) Preparación de las muestras y del gel:
1)Prepare la cama sellando los bordes por presión y pongale los peines.
2)Pese 0,7gr de Agarosa.
3)Coloque la Agarosa en unerlenmeyer que contenga 70ml de buffer TAE y caliente en el microondas hasta su disolución.
4)Cuando la solución de Agarosa se haya entibiando agregar 0,20ul de Syber Green.
5)Mezcle bien, enforma circular.
6)Vierta la solución en la bandeja de corrida.
7)Deje polimerizar la Agarosa.
8)Para la corrida, llene el tanque de la cámara de electroforesis con buffer...