Electroforesis En Gel De Poliacrilamida

SEPARACION DE PROTEINAS POR ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA
Objetivos
* Efectuar la separación de proteínas de varias muestras mediante la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida.
* Determinar cuál es el tamaño óptimo de poro del gel, para la mejor separación de cada uno de las muestras.
Resultados
1.
Características de los electroferogramas a diferentes %T |  | %T | 5.5 | 7.5 | 10.0 | 12.5 |
Característica | | | | |
Longitud del gel antes de teñir (cm) (l) | ~ | ~ | ~ | ~ |
Longitud del gel después de teñir (cm) (l') | 7.5 | 7.5 | 7.5 | 8.2 |
Distancia recorrida por el colorante (cm) (f) | 3.4 | 5.7 | 4.5 | 4.8 |
No de Bandas | Suero | 8 | 8 | 10 | 11 |
| Yoghurt | 5 | 12 | 13 | 10 |
| Clara | 6 | 11 | 12 | 10 |

2.Movilidad Electroforética Relativa Promedio |   |   |
%T | Proteína | Valores de m (cm) | Distancia promedio recorrida m (cm) | M | Mx100 | Log (Mx100) |
5.5 | Clara | 1.7 | ~ | ~ | ~ | ~ | ~ | ~ |
| Suero | 1.9 | 2.0 | 2.1 | ~ | ~ | ~ | ~ |
| Yoghurt | 3.1 | 3.1 | 3.2 | ~ | ~ | ~ | ~ |
7.5 | Clara | 5.4 | 5.4 | 5.4 | 5.40 | 0.9474 | 94.74 | 1.977 |
| Suero | 5.0 | 4.9 | 4.9 | 4.93 |0.8655 | 86.55 | 1.937 |
| Yoghurt | 4.5 | 4.5 | 4.4 | 4.47 | 0.7836 | 78.36 | 1.894 |
10 | Clara | 4.0 | 4.0 | 4.0 | 4.00 | 0.8889 | 88.89 | 1.949 |
| Suero | 3.7 | 3.6 | 3.7 | 3.67 | 0.8148 | 81.48 | 1.911 |
| Yoghurt | 3.3 | 3.3 | 3.3 | 3.30 | 0.7333 | 73.33 | 1.865 |
12.5 | Clara | 4.0 | 4.0 | 3.9 | 3.97 | 0.8264 | 82.64 | 1.917 |
| Suero | 3.4 | 3.4 | 3.4 | 3.40 | 0.7083 | 70.83| 1.850 |
| Yoghurt | 3.2 | 3.2 | 3.2 | 3.20 | 0.6667 | 66.67 | 1.824 |
La movilidad (M) se calculo usando la formula:
M=mf
Donde m es la distancia promedio recorrida por la proteína de la muestra problema.
Y f es la distancia total recorrida por el colorante
3.

4. Concluya acerca del tamaño molecular relativo de las proteínas y sus cargas eléctricas relativas al pH del reguladorde trabajo (8.7 a 9.1).
| Clara (Ovoalbúmina) | Suero (Seroalbúmina) | Yoghurt (Proteína X) |
Pendiente | -0.0119 | -0.0174 | -0.014 |
Ordenada al origen | 2.0662 | 2.0736 | 2.0015 |

La proteína más grande resulto ser la Seroalbúmina seguida de la Proteína X y por último la Ovoalbúmina.
La proteína con mayor carga fue la Seroalbúmina seguida de la Proteína X y por último laOvoalbúmina.
5. Diga cual %T recomienda para la separación de las proteínas de cada muestra. ¿Por qué?
El %T recomendado para el Suero es 12.5
El %T recomendado para la Clara y el Yoghurt es de 10.
La razón por la que se seleccionan estos %T como los óptimos es porque en estos se encontraron mayor numero de bandas separadas, es decir, mayor numero de proteínas aisladas lo suficiente para poderdistinguirlas y contabilizarlas. A estos %T para cada problema se logra la mejor separación de proteínas.

6. Escriba la reacción completa para la copolimerización de la acrilamida y la bis-acrilamida por radicales libres. ¿Qué función tiene el TEMED y el persulfato de amonio?

El TEMED y el Persulfato de Amonio son catalizadores que inician la reacción de polimerización de la poliacrilamida. Lareacción de polimerización se inicia por un sistema redox de catálisis. El TEMED cataliza la formación de radicales libres que dirigen la reacción a partir del ión persulfato que se añade en forma de PSA (Persulfato Amónico) y actúa como iniciador.
7. Mencione una aplicación de la electroforesis preparativa y una de la electroforesis analítica.
Electroforesis preparativa: Aislamiento ypurificación de ácidos nucleídos.
Electroforesis analítica: Separación de proteínas.

8. Defina velocidad de migración y movilidad electroforética.
La velocidad de migración es la velocidad con la cual un ion se dirige al electrodo de carga opuesta.
La movilidad electroforética de una molécula se define como la migración por unidad de campo de fuerza. La movilidad electroforética depende de la...