Electroforesis, Inmunodifusión, Inmunoeletroforesis y Contrainmunoeletroforesis

Electroforesis
• Es una técnica para separar las moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico.
• Puede realizarse en la superficie hidratada de un soporte solido (papel o acetato decelulosa) o en una matriz porosa (gel de agarosa).
• La separación obedece a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
• Ánodo (+) y Cátodo (-).
• La movilidad de las moléculas depende delos factores siguientes:
 Carga de la partícula.
 Masa de la partícula.
 pH del medio.
 Fuerza iónica.
 Temperatura generada en el proceso.
 Voltaje aplicado.
 Tipo de soporte.
Aplicación• Estudio de ácidos nucleicos ADN y ARN, estos ya tienen carga negativa y migran al ánodo y realiza en gel de agarosa.
• Estudio de las proteínas del suero, las cuales toman carga negativa alestar en contacto con un detergente como el duodecil sulfato sódico y migran a diferente velocidad en base a carga/masa.
• Se lleva a cabo en geles de poliacrilamida – SDS.
• Después de laelectroforesis se revela con colorantes para hacerlos visibles para ácidos nucleicos ADN y ARN (bromuro de etidio) y para proteínas (azul de coomassie y tinción de plata).
Inmunoelectroforesis
• Es una técnicacualitativa que permite separar las proteínas (Ag) por su relación carga/masa aplicando un campo eléctrico y luego precipitándolas por difusión de los Ac (24 horas a temperatura ambiente) formandobandas de precipitación.
Aplicación
• Identificación de diferentes Ig.
• Detectar presencia o ausencia de Igs.
• Separación e identificación de Ag.
Inmunodifusión
• Prueba de precipitación en mediossemisólidos como geles de agar, dejando difundir un reactivo hacia el otro o ambos reactivos al mismo tiempo.
• El Ag debe ser soluble.
• Existen dos tipos: Inmunodifusión simple e inmunodifusióndoble.
Inmunodifusión simple (radial)
• Es una prueba de precipitación en gel donde sólo difunde un reactivo Ag o Ac.
• Sirve para investigar Ags o Acs de forma cualitativa y cuantitativa.
• Su...