Electroforesis practica 11

PRACTICA No. 11

Electroforersis de RNA total

OBJETIVO
Separación de las moléculas de RNA por electroforesis en gel

MATERIAL Y EQUIPO
MATERIAL REACTIVOS EQUIPO
GUANTES RNATOTAL SANGRE JUEGO DE MICROPIPETAS
BATA Buffer de corrimiento microcentrífuga
CUBETA DE HIELO Buffer de cargado Syber Green Cámara de electroforesis
JUEGO DE PUNTAS MICROPIPETASFuente de poder
TUBOS EPPI 500 L fotodocumentador


PROCEDIMIENTO
FECHA HORA DESCRIPCION
Tomar las muestras de RNA total presipitadas en alcohol
Centrifugar los tubos por 3min a 10000g
Eliminar el alcohol del tubo y evaporar por centrifugación 3min a 10000g
Secar la muestra por 15min a Temperatura Ambiente con tubo abierto
Resuspender con agualibre de RNAsas en 30microL
Prepara gel de agarosa al 2% 50 mL 5 microlitros
Corrimiento de las muestras a 90V por 45 a 60 min
Revelado de gel en UV y fotografia



TABLASDE MANIPULACION
M.1MEZCLA DE REACCION PARA Apa I
Reactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer V5 10x 5
Apa I 1
Agua destilada 42
Total 50

M.2 MEZCLA DE REACCION PARA Pst IReactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer V3 10x 5
Pst I 1
Agua destilada 42
Total 50

M.3 MEZCLA DE REACCION PARA Eco RI
Reactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer Eco RI 10x 5
Eco RI 1Agua destilada 42
Total 50

M.4 MEZCLA DE REACCION PARA Hpa II
Reactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer V5 10x 5
Hpa II 1
Agua destilada 42
Total 50

M.5 MEZCLA DEREACCION PARA Mps I
Reactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer V2 10x 5
Mps I 1
Agua destilada 42
Total 50

M.6 MEZCLA DE REACCION PARA HindIII
Reactivo Volumen (L)
DNA 2NEBuffer 2 10x 5
Hind III 1
Agua destilada 42
Total 50

M.7 MEZCLA DE REACCION PARA Mbo II
Reactivo Volumen (L)
DNA 2
Buffer V5 10x 5
Mbo II 1
Agua destilada 42
Total 50