Electroforesis Spg
Páginas: 29 (7155 palabras)
Publicado: 21 de julio de 2011
31 UNIV DIAG 2000;1(2):31-41
LABORATORIOS BETERÁ
Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos, actualidad e importancia
Dra.Hilda Marilín García Pérez1
RESUMEN Mediante la electroforesis es posible separar moléculas biológicas en dependencia fundamentalmente de su carga bajo la influencia de un campo eléctrico. Se dio una visión general de la electroforesis en geles depoliacrilamida para proteínas en condiciones nativas o desnaturalizadas, se incorporaron nuevos conocimientos tomados de la literatura reciente a los conceptos tradicionales de este método, como son la adición de compuestos de restricción de la difusión y que aumentan la estabilidad de los geles. Se ejemplificó el comportamiento anómalo de algunas proteínas en la determinación del peso molecular porelectroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizadas. Palabras clave: electroforesis, poliacrilamida, geles.
La electroforesis es un método analítico – semipreparativo, en el que se separan biomoléculas, en dependencia entre otros factores de su carga y bajo la acción de un campo eléctrico, fue empleado por primera vez por Tiselius en el año 1937. Raymond y Weintraub en 1959emplearon como soporte para la electroforesis un gel de poliacrilamida (PAGE), posteriormente el método fue perfeccionado por varios investigadores como Davis y Ornstein. La popularidad de este creció rápidamente y se logró un aumento de la resolución. El dodecil sulfato de sodio (SDS) se introduce en esta técnica en 1970, y ya en 1972 se emplean agentes reductores y SDS en la determinación delpeso molecular de proteínas en lo que se denominó electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE). En este trabajo se da un bosquejo general de la electroforesis, si se tiene en cuenta el desarrollo desde su surgimiento hasta el presente.
DESARROLLO
1. Fundamentos de la electroforesis La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico;Estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una
combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional. Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otrasbiomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros como peso molecular, punto isoeléctrico y númerode cadenas polipeptídicas de las proteínas. La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
V=qE/f
La movilidad electroforética (Me) es uncaso particular de la velocidad de migración de un ión,
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Master en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Agregada.
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cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm. Su signo es igual al de la carga de la partícula. La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel deelectroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética.1 La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y...
LABORATORIOS BETERÁ
Electroforesis en geles de poliacrilamida: fundamentos, actualidad e importancia
Dra.Hilda Marilín García Pérez1
RESUMEN Mediante la electroforesis es posible separar moléculas biológicas en dependencia fundamentalmente de su carga bajo la influencia de un campo eléctrico. Se dio una visión general de la electroforesis en geles depoliacrilamida para proteínas en condiciones nativas o desnaturalizadas, se incorporaron nuevos conocimientos tomados de la literatura reciente a los conceptos tradicionales de este método, como son la adición de compuestos de restricción de la difusión y que aumentan la estabilidad de los geles. Se ejemplificó el comportamiento anómalo de algunas proteínas en la determinación del peso molecular porelectroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizadas. Palabras clave: electroforesis, poliacrilamida, geles.
La electroforesis es un método analítico – semipreparativo, en el que se separan biomoléculas, en dependencia entre otros factores de su carga y bajo la acción de un campo eléctrico, fue empleado por primera vez por Tiselius en el año 1937. Raymond y Weintraub en 1959emplearon como soporte para la electroforesis un gel de poliacrilamida (PAGE), posteriormente el método fue perfeccionado por varios investigadores como Davis y Ornstein. La popularidad de este creció rápidamente y se logró un aumento de la resolución. El dodecil sulfato de sodio (SDS) se introduce en esta técnica en 1970, y ya en 1972 se emplean agentes reductores y SDS en la determinación delpeso molecular de proteínas en lo que se denominó electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE). En este trabajo se da un bosquejo general de la electroforesis, si se tiene en cuenta el desarrollo desde su surgimiento hasta el presente.
DESARROLLO
1. Fundamentos de la electroforesis La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico;Estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una
combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional. Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidos nucleicos, proteínas y otrasbiomoléculas, donde aportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otros parámetros como peso molecular, punto isoeléctrico y númerode cadenas polipeptídicas de las proteínas. La velocidad de migración (v) de la partícula es directamente proporcional al producto de su carga efectiva (q) y el gradiente de potencial eléctrico (E) e inversamente proporcional al coeficiente de fricción (f) relativo a la talla y forma de la molécula, o sea, a la resistencia que le ofrece el medio.
V=qE/f
La movilidad electroforética (Me) es uncaso particular de la velocidad de migración de un ión,
1
Master en Ciencias Bioquímicas. Investigadora Agregada.
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cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm. Su signo es igual al de la carga de la partícula. La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltaje aplicado y de la porosidad del gel deelectroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética.1 La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseen determinada carga eléctrica con grupos aniónicos y...
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