Electroforesis Y Dialisis

Introducción:
En la práctica realizaremos 2 procedimientos para la separación y purificación de diferentes biomoléculas, las cuales son electroforesis y diálisis.
Diálisis: Es un tipo de filtración en el que las moléculas gracias a paso a través de una membrana semipermeable de celofán consiste en el paso de moléculas de bajo peso molecular a través de una membrana dializadora cuyos poros sonultramicroscópicos.
Electroforesis: Es un tipo de filtración y separación e identificación de mezclas de compuestos biológicos, sirviendo tanto en método analítico como separativo para la posterior realización de otras técnicas analíticas. La electroforesis es el fenómeno por medio del cual una molécula con carga neta se desplaza en un campo eléctrico.
En la practica el compuesto que pretendemosobtener es la amilasa la cual obtendremos a partir de la saliva. La amilasa es una enzima degradadora que ayuda a la pre digestión; sus activan tés son cloruro, yoduro, bromuro, nitratos, aspagina-
Dependiendo de la carga eléctrica las moléculas y los compuestos se separan en distintos polos en el procedimiento de la electroforesis sin embargo hay compuestos en los cuales su carga neta es decero y a esto se le denomina punto isoeléctrico el cual se calcula con la siguiente formula:
p.I.= pka1+pKa22

Objetivos:
General:
Dializar una muestra de saliva y comparar la actividad de la enzima amilasa de diferentes sujetos, mediante un método cualitativo colorimétrico en muestras directas y dializadas
Separar una mezcla de aminoácidos, mediante electroforesis en papel y revelarlos condihidrita para su identificación.
Particulares:
Comprender el fundamento de las técnicas de separación y purificación (electroforesis y diálisis)
Aprender a realizar correctamente la diálisis y una electroforesis
Identificar que aminoácidos contiene la muestra biológica (saliva)
Metodología
La indicada en el manual de Bioquímica, correspondiente a la práctica Diálisis y electroforesis,pagina 37 y 38.
Observaciones y resultados:
Analisis de resultados
ANALISIS DE RESULTADOS ELECTROFORESIS
Algunos de los factores que afectan en el desarrollo de una electroforesis y que condicionan su utilidad en el laboratorio, son básicamente:
La carga neta de la sustancia en migración
La fuerza iónica del medio
La estructura y el tamaño de la sustancia
El potencial del campo eléctricoaplicado durante el proceso
La intensidad y características generales de la corriente eléctrica aplicada
El soporte utilizado
El revelado
Carga neta de la sustancia en migración
La influencia del pH sobre la carga neta es especialmente importante ya que hay sustancias que, dado su carácter anfótero (es el caso de las proteínas) pueden encontrarse cargadas positiva, o negativamente.
Se definecomo punto isoeléctrico (pl) como, aquel valor de pH al cual el balance de cargas positivas y negativas superficiales de una sustancia es cero (carga neta nula). Al pH de su punto isoeléctrico, una sustancia no presenta carga neta alguna y por tanto, al ser sometida a un proceso electroforético no migra (permanece inmóvil el punto de aplicación).
Cuando el pH es superior al pl, la sustancia seencuentra cargada negativamente (el numero de cargas negativas supera al de las positivas) y, sometida a una electroforesis migrara hacia el polo positivo (ánodo). Cuando el pH del medio es inferior al de su punto isoeléctrico, la sustancia cargada positivamente se dirigirá hacia el cátodo (polo negativo).
Fuerza iónica del medio
Al igual que el pH final, la fuerza iónica depende del tampónelegido para la electroforesis.
En un proceso electroforético, la corriente eléctrica es transportada por todos los iones presentes, tanto los debidos a la muestra en solución, como los del tampón utilizado. Cuanto mas concentrado se encuentre el tampón, mayor es la proporción de corriente transportada por los iones del tampón y menor la transportada por la muestra que se desea separar, de manera que...