Electroforesis

I. INTRODUCCION. 2

II.CONOCIMIENTOS PREVIOS 2

III. OBJETIVO 3

IV. METODOLOGIA 4
IV.1. Material y equipo 4
IV. 2. Reactivos y soluciones 4
IV. 3. Requerimientos de seguridad 4
IV.4 Disposición de residuos 4
IV. 5. Procedimiento 4

VI. DISCUSIÓN 6

VII. CONCLUSIONES 6

VIII. BIBLIOGRAFIA 7

I. INTRODUCCION (Recuerden modificar y personalizar su información)

Lamayoría de los polímeros biológicos poseen carga y, por lo tanto, cuentan con la capacidad de migrar bajo la influencia de un campo eléctrico. El transporte de partículas a través de un disolvente mediante un campo eléctrico recibe el nombre de electroforesis.

Por lo general para caracterizar la molécula se determina la velocidad a la que esta se mueve en un campo eléctrico y se utiliza paradeterminar el peso molecular en el caso de proteínas o para detectar cambios de aminoácidos y separar cuantitativamente distintas especies moleculares.

La electroforesis es un método analítico – semipreparativo, en el que se separan biomoléculas, en dependencia entre otros factores de su carga y bajo la acción de un campo eléctrico, fue empleado por primera vez por Tiselius en el año 1937. Raymond yWeintraub en 1959 emplearon como soporte para la electroforesis un gel de poliacrilamida (PAGE), posteriormente el método fue perfeccionado por varios investigadores como Davis y Ornstein. Para separar ácidos nucleicos es común utilizar geles de agarosa.
Las variables que más comúnmente afectan la migración de los ácidos nucleicos en un gel son:
la conformación del ácido nucleico(superhelicoidal (forma I), lineales (forma II) y anillada (forma II), su velocidad de migración es inversamente proporcional al peso molécular del fragmento de interés.
el tamaño del poro del gel
el voltaje aplicado
la concentración de sal en el amortiguador

Los colorantes usados como amortiguador de carga son el xilen-cianol y el azul de bromofenol. El xilen-cianol típicamente migra con fragmentos deDNA de 5 kb y el azul de bromofenol con los de aproximadamente 0.5 kb, por lo cual este último provee un índice de la movidlidad de los fragmentos rápidos y es últil para ver la distancia que ha corrido el gel. El xilen-cianol es útil para seguir el progreso de los fragmentos grandes. Los dos pueden interferir con la observación de los fragmentos que comigran con ellos.

El bromuro de etidio seintercala entre las bases del DNA, extendiendo su longitud y fluoresce de naranja con luz UV, pueden detectarse cantidades de 5 ng de DNA. (Freifelder, D. 1981)

II.CONOCIMIENTOS PREVIOS

La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas (proteínas o ácidos nucleicos) según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separapor tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al polo positivo. Para la separación se usa un gel de agarosa o poliacrilamida (fibras cruzadas, como una malla). Al poner la mezcla de moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la malla, por la quelas pequeñas se moverán mejor, más rápidamente. Así, las más pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida.

Se aplica una diferencia de potencial eléctrico entre dos electrodos con carga eléctrica opuesta y los iones presenten en la disolución se mueven hacia uno u otro electrodo según su propia carga:

• Los cationes (iones con carga eléctrica positiva) semueven hacia el cátodo.

• Los aniones (iones con carga eléctrica negativa) se mueven hacia el ánodo

Las condiciones teóricas sobre electroforesis dan por sentado que esta se lleva a cabo en un medio inerte. En la práctica la situación es más compleja, ya que los componentes de las muestras interaccionan o se mezclan con los componentes de la disolución en la que se realiza la...