Electroforesis

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y FARMACIA
DEPARTAMENTO DE FISICOQUIMICA
MÉTODOS DE ANALISIS INSTRUMENTAL

ELECTROFORESIS

Jorge Raúl Valverth, 200614890
Guatemala, Viernes 17 de Diciembre 2010
Instrumentación
1. Soportes: Debido a sus múltiples variantes, en la electroforesis existe variedad de soportes, de entre los cuales vale la penamencionar:
* Papel
* Geles
* Acetatos
2. Electrodos
3. Fuente de Potencial (capaz de generar hasta 30kV)
COMO FUNCIONA
La Electroforesis separa los componentes de una mezcla basándose en la movilidad de estos en un campo eléctrico. La separación puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido. Dependiendo de la técnica que seuse, la separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su masa.
Descartando la electroforesis libre debido a su escasísimo uso, exponemos la lista de las técnicas más usadas actualmente, comúnmente con geles de poliacrilamida.
1. Electroforesis en Gel: Un gel es un estado intermedio entre el sólido y el líquido. Este tipo de electroforesis se halla entre losmétodos más resolutivos y convenientes empleados en la separación de macromoléculas. Los geles de uso más generalizado son: poliacrilamida y agarosa. Éstos poseen poros de diferentes dimensiones moleculares que delimitan la velocidad de traslado y moléculas trasladadas durante el proceso electroforético. De esta forma, la separación no se produce sólo por las diferentes cargas de las moléculas, sinotambién por las diferencias de tamaño. Los geles están formados por un reticulado de polímeros (constituyendo una red enmarañada) y el líquido intersticial en el que se encuentra inmerso esta red.

Existe una gran variedad de tipos de electroforesis en gel, que se pueden agrupar en dos categorías:

* Electroforesis en gel en una dimensión
* PAGE-nativa (PAGE:electroforesis en gel de poliacrilamida)
* SDS-PAGE (SDS-PAGE: electroforesis desnaturalizante en gel de poliacrilamida; SDS: dodecil sulfato sódico)
* Isoelectroenfoque
* Electroforesis en gel en dos dimisiones (bidimensional)

La PAGE-nativa se utiliza para separar proteínas en condiciones no desnaturalizantes, por tanto, en función de la carga intrínseca de lasmismas. La SDS-PAGE es muy útil para calcular el peso molecular de una proteína concreta ya que separa las proteínas según su tamaño. El Isoelectroenfoque es un tipo de PAGE en una dimensión que se basa en la separación de moléculas de acuerdo a sus diferentes puntos isoeléctricos.
La electroforesis en gel en dos dimensiones combina el Isoelectroenfoque (primera dimensión) con la SDS-PAGE(segunda dimensión). Es una técnica muy resolutiva, y el mejor método analítico para separar proteínas que existe hoy en día.
Según las aplicaciones u objetivos que se pretendan conseguir en una práctica o experimento, se utilizará un tipo u otro de electroforesis en gel. Los geles discontinuos mejoran la resolución de la electroforesis pues se consigue agudizar las bandas en gran medida por el uso deesta técnica conocida como electroforesis a pH discontinuo que precisa de dos geles y dos tampones diferentes.

2. Electroforesis en Papel
La electroforesis en papel se emplea principalmente en la separación de sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y péptidos. La difusión que se produce puede disminuirse aumentando la diferencia de potencial entre los electrodos con lo que sereduce el tiempo de desarrollo. Este tipo de electroforesis se denomina de “alto voltaje”. El revelador para localizar las sustancias sería la ninhidrina en el caso de péptidos y aminoácidos.
La principal aplicación es la separación de proteínas del suero, conociéndose el resultado como proteinograma. Las fracciones proteicas del suero que se separan mediante este tipo de electroforesis son la...