Electroforesis

Modulo 3. TP ELECTROFORESIS / FISICA 2011

TP ELECTROFORESIS
MODULO 3
CATEDRA DE FISICA
FFYB
UBA 2011

Alumnos: Rosales, Lucía
Panizza, Paula
Carneiro, Matías
Balabasquer , Lucía
Francisco, Federico
Jefes de TP.: Federico,Monczor
Andrea, Beltrán
TP ELECTROFORESIS / FISICA 2011

OBJETIVOS
* Calcular la movilidad electroforética (μ) de los aminoácidos lisina y acido aspártico.
* Analizar como las variables experimentales afectan la distancia recorrida por una molécula cargada cuando la misma es sometida a un campo eléctrico.

FUNDAMENTOS
La electroforesis es una técnica separativa que se basa en elfenómeno de migración diferencial que experimentan partículas cargadas eléctricamente al estar bajo la influencia de un campo eléctrico. La electroforesis puede utilizarse con fines analíticos o preparativos según cuál sea el objetivo perseguido: la identificación de sustancias o su separación cuando forma parte de una mezcla. Asimismo, según el diseño experimental puede utilizarse para determinarpesos moleculares, cuantificar sustancias, etc. En todos los casos es necesario aplicar las condiciones correctas para obtener una buena resolución de los componentes a analizar y/o separar.
Una carga eléctrica inmersa en un campo eléctrico experimenta una fuerza de atracción o repulsión , como describe la Ley de Coulomb:
Fe=k. q1.q2d2
La carga se desplazará en el medio hacia el polo que poseecarga opuesta como consecuencia de la fuerza de atracción eléctrica: las moléculas cargadas positivamente se desplazarán hacia el cátodo (polo negativo) y las cargadas negativamente se desplazarán hacia el ánodo (polo positivo).Podemos comparar el movimiento de las partículas hacia cada uno de sus polos , con el movimiento de un objeto dentro de un liquido ( por ejemplo método de Stokes) , lo quecausa que la partícula (en nuestro caso Aminoácidos) tengan una fuerza contraria a la dirección de movimiento, la fuerza de rozamiento, que es proporcional a la velocidad de la partícula.

Siendo k, el coeficiente de proporcionalidad o coeficiente de fricción, en el cual están incluidas variables como la viscosidad del medio, el tamaño y la forma de la partícula. La fuerza de rozamiento dependeráentonces de estas tres variables, además de la velocidad de la partícula.
Por lo dicho anteriormente, puede considerarse que durante todo el desplazamiento la sumatoria de fuerzas sobre la partícula es igual a cero, por lo tanto, está en equilibrio. Otras causas que intervienen en la velocidad con que la partícula se mueve son, la temperatura, la fuerza iónica y el pH del medio en el cualtrabajamos.
La fuerza iónica es una medida de las cargas en una solución, estima la actividad de los electrolitos en solución según su carga y concentración. Una mayor fuerza iónica, da cuenta de una mayor concentración de iones en la solución. Una partícula con carga cuando se halla en solución está rodeada por electrolitos de carga opuesta, como consecuencia de la acción de la fuerza de atracciónelectroestática. Es así que, una carga positiva en solución estará rodeada de cargas negativas y una negativa por carga positivas. Esta esfera de cargas en el entorno dependerá a su vez del número y tipo de cargas disueltas en la solución (fuerza iónica).
El pH influye sobre la carga que adquieren los grupos ácidos y básicos débiles presentes en las moléculas biológicas. Por lo tanto, se ionizanparcialmente en solución coexistiendo en equilibrio distintas especies y modificando su carga
La temperatura afecta la velocidad con la que se desplaza la partícula por incidir en tres instancias específicas. En primer lugar, hay que considerar que la viscosidad del buffer es una constante física que depende de la temperatura, por ende el coeficiente de fricción variará según cuál sea el valor de...