Electroforesis

ELECTROFORESIS
La historia de la electroforesis comienza en serio con la obra de Arne Tiselius en la década de 1930, y los nuevos procesos de separación y análisis químico basado en técnicas de electroforesis de seguir desarrollándose en el siglo 21. Tiselius, con el apoyo de la Fundación Rockefeller , desarrolló el " aparato de Tiselius "para mover los límites de electroforesis , que fuedescrito en 1937 en el conocido papel así " un nuevo aparato para el análisis electroforético de las mezclas coloidales ". [1] El método de propagación lenta hasta la llegada de efectivos zona de electroforesis métodos en los años 1940 y 1950, que utiliza papel de filtro o geles como el apoyo a los medios de comunicación. En la década de 1960, cada vez más sofisticados electroforesis en gel de métodoshizo posible separar biológicos basados en el minuto y químicas diferencias físicas, ayudando a impulsar el auge de la biología molecular . electroforesis en gel y las técnicas relacionadas convirtió en la base para una amplia gama de métodos bioquímicos , como la huella dactilar de proteínas , Southern Blot y procedimientos similares, la secuenciación del ADN , y muchos más.
La electroforesises una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
La técnica clásica utiliza una tira recubierta de una sustancia porosa impregnada de un electrolito. Sus extremos se sumergen en dos depósitos independientesque contienen ambos al electrolito y están unidos a los electrodos del generador de corriente. La muestra se deposita en forma de un pequeño trazo transversal en la tira. La distancia de migración se mide en relación un marcador interno. Las placas son reveladas con sales de plata, azul de Coomassie, o reactivos en particular.


En un sistema electroforético pueden originarse distintosfenómenos que afectan la separación de las sustancias:
• Difusión
Este fenómeno es provocado por la existencia de gradientes de concentación que favorecen el transportehacia las zonas de menor concentaración de cada especie. Afecta tanto a partículas cargadas como no cargadas. Las moléculas tienden a moverse de una forma aleatoria debido a que poseen energía cinética propia. Esto es lo que se denominadifusión. Con un aumento de la temperatura aumentará la difusión por un incremento de la energía cinética.
• Migración
Es el movimiento producido por una fuerzaexterna que es impuesta al medio, en este caso, el campo eléctrico y su intensidad.
• Flujo térmico
Al pasar una corriente eléctrica a través de un sistema que origina una resistencia dada, se produce calor. Por tanto el sistemaelectroforético no es isotérmico. En general la fase líquida se mueve hacia las zonas de menor temperatura, lo que origina un transporte de las partículas de interés no debido a la migración.
• Fricción
La fricción con el solvente dificultará el movimiento (es decir, al moverse los solutos chocarán con las moléculas del solvente que están en su camino), lo que genera una fuerza que se opone almovimiento.
La suma de todos estos factores provoca que las moléculas no migren de una manera uniforme, de modo que, si las moléculas son colocadas en un cierto lugar de la solución, los iones comenzarán a moverse formando un frente cuya anchura aumentará con el tiempo. Para reducir esta anchura podemos reducir el movimiento de las moléculas empleando un medio que oponga más resistencia a dichomovimiento.

Tipos de electroforesis
Electroforesis de frente móvil o libre
Las sustancias a separar se introducen en un tubo en forma de U, disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica adecuados. Se colocan dos electrodos en sendos brazos del dispositivo, entre los que se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de proteína cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad...