Electroforesis

La electro foresis es un método común para separar las moléculas en un campo eléctrico. Este método es extremadamente útil para determinar las propiedades importantes de las proteínas y los ácidos nucleicos.
Está basada en el movimiento de partículas cargadas en un campo eléctrico hacia un electrodo de carga opuesta. Las macromoléculas tienen diferentes movilidades basadas en su carga, forma ytamaño.
Los soportes que se usan para la electroforesis pueden ser papel y líquidos pero el soporte más común es un polímero de agarosa o acrilamida que es similar a aquellos usados en la cromatografía de columna. La muestra se aplica en los carriles que son formados en el medio de soporte. Se pasa una corriente eléctrica a través del medio en un voltaje controlado para lograr la separacióndeseada. Después de que las proteínas son separadas en el gel, este es teñido para revelar la posición de la proteína.

Este método se emplea cuando hay por lo general una mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta; estas moléculas son sometidas a un campo eléctrico donde experimentan fuerzas de atracción hacia el polo que posee carga opuesta ya sea al positivo o negativo.

Elmovimiento de las moléculas también es afectado por la fricción con el solvente en el que estén, pues este dificultará el movimiento originado por la diferencia de cargas opuestas. La energía cinética de las moléculas hace que haya una difusión más lenta o rápida hacia su electrodo dependiendo a la temperatura en la que se encuentra. La energía cinética aumenta con la temperatura, por ello a mayortemperatura mayor difusión.
Todas estas fuerzas provocan que las moléculas no migren de manera homogénea, por lo que es posible que se llegue a formar un frente, provocado por lo iones, y no se podrá separar de forma correcta. Para que esto se evite es necesario usar un medio donde se pueda reducir el movimiento molecular. Un medio común para hacer esto es usando un gel. El gel consiste de unpolímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz que dificulta el movimiento de los solutos, consecuentemente, la migración electroforética de las moléculas será mas lenta, pero el grosor del frente se reducirá también.

Los métodos electroforeticos zonales
Son los mas usados. Son utiles para separar mezclas complejas. Se aplican pequeñas cantidades de ladisolución de proteínas a un soporte sólido, que se impregnan con una solución buffer. Los soportes son en general polímeros y forman un gel poroso que restringe el movimiento de las moléculas a través del medio durante la electroforesis y disminuyen los flujos de convección del solvente.
Como soporte se puede utilizar papel (celulosa), almidón, poliacrilamida, agarosa y acetato decelulosa, entre otros. Este método es muy eficiente por que se aplica una cantidad pequeña de proteína a una zona estrecha, mientras que la longitud del trayecto es mucho mayor que la zona de aplicación. El equipo que se necesita no es muy elaborado; se necesita: fuente de poder, cubeta vertical u horizontal donde se colocan el soporte y dos electrodos.

Electroforesis en gel de poliacrilamida.Los geles de poliacrilamida se forman por polimerización de la acrilamida. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado. La SDS-poliacrilamida ofrece más resistencia en las moléculas mas grandes que a las más pequeñas, esto sucede porque la forma y lacarga son aproximadamente las mismas para todas las proteínas de la muestra y por lo tanto el tamaño se convierte en el factor determinante en la separación, a menos tamaño mayor velocidad. El método SDS-PAGE es muy útil para estimar pesos moleculares. Lamentablemente el gel de policrilamida cada vez se emplea menos en diagnostico debido a su neurotoxocidad.

Electroforesis en geles de...