electroforesis

ELECTROFORESIS: La electroforesis es la migración de solutos iónicos bajo la influencia de un campo eléctrico; estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), en dependencia de una combinación de su carga, peso molecular y estructura tridimensional.
La mayoría de los polímeros biológicos poseen carga eléctrica y por lo tanto son capaces de migrar bajo la influencia de uncampo eléctrico. Una forma usual de caracterizar una macromolécula es la determinación de la velocidad con que se mueve al someterla a un campo eléctrico, esta propiedad puede ser utilizada para calcular el peso molecular de una proteína, distinguir moléculas por su carga neta o forma, para detectar cambios de aminoácidos y para separar cuantitativamente diferentes especies moleculares. El químicosueco Arne Tisenius investigo por primera vez esta técnica de separación en los años treinta para estudiar proteínas séricas. En 1948 fue galardonado con el premio nobel de química por este trabajo.
Es de destacar que a escala analítica, los métodos electroforéticos son de alta sensibilidad, poder de resolución y versatilidad, y sirven como método de separación de mezclas complejas de ácidosnucleicos, proteínas y otras biomoléculas, dondeaportan un potente criterio de pureza. Se pueden conocer también mediante estas técnicas, las características ácido-básicas de las proteínas presentes en un extracto crudo, lo que da la información necesaria si se pretende realizar una separación cromatográfica basada en diferencias de carga. Es útil además para determinar otrosparámetros como pesomolecular, punto isoeléctrico y número de cadenas polipeptídicas de las proteínas.
La movilidad electroforética (Me) es un caso particular de la velocidad de migración de un ión, cuando se aplica un campo eléctrico de 1 V/cm. Su signo es igual al de la carga de la partícula.
La velocidad de migración electroforética depende de la densidad de carga de la molécula (relación carga / peso), del voltajeaplicado y de la porosidad del gel de electroforesis. El voltaje no se puede incrementar indiscriminadamente porque se genera un excesivo calor. En contraste, al aplicar bajo voltaje puede ocurrir una pobre separación, por causa de la difusión por tiempo muy prolongado de la corrida electroforética.
La mayoría de las biomacromoléculas (proteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) poseendeterminada carga eléctrica con grupos aniónicos y catiónicos capaces de disociarse. La carga neta de la partícula está dada por el pH del medio y puede ser modificada por la interacción con pequeñas moléculas de iones u otras macromoléculas. De lo anterior se deduce que el pH influye sobre la velocidad de migración de las moléculas.2 En el punto isoeléctrico de la biomolécula, pH al cual su carga neta es0, esta no migra. Por debajo del punto isoeléctrico tiene carga neta positiva y migra hacia el cátodo, y por encima del punto isoeléctrico tienen carga neta negativa y migra hacia el ánodo.
me gusta el segundo; la electroforesis es un técnica ampliamente usada en el análisis de proteínas. Deberán explicar le fundamente de la técnica y los diferentes tipos de electroforesis que hay como lasbidimensionales, el isoelectroenfoque, etc.
TIPOS DE ELECTROFORESIS
ELECTROFORESIS BIDIMENCIONAL: Es una sucesión de dos electroforesis distintas (o en distintas condiciones) realizadas sobre una misma muestra. En la primera de ellas (primera dimensión) se separan los componentes de la muestra según un criterio (carga, tamaño o pI), y en la segunda (segunda dimensión) según un parámetro distinto delanterior. De esta manera, se combinan dos modos de separación diferentes y se consigue el máximo de resolución posible mediante técnicas electroforéticas.
La primera dimensión puede llevarse a cabo, por ejemplo, en condiciones no desnaturalizantes y la segunda en condiciones desnaturalizantes; las proteínas ribosomales se separan en un gel discontinuo en la primera dimensión, seguido por otro...